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為了探究生物過程的分子機(jī)制，有必要確定介導(dǎo)該過程的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,。研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的主要技術(shù)總結(jié)如下：

1. 酵母雙雜交系統(tǒng)

酵母雙雜交系統(tǒng)是廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)相互作用組學(xué)研究的重要方法,。其原理是，當(dāng)目標(biāo)蛋白和誘餌蛋白特異性結(jié)合時(shí),，誘餌蛋白與報(bào)告基因的啟動子結(jié)合,，啟動報(bào)告基因在酵母細(xì)胞中的表達(dá)。如果檢測到報(bào)告基因的表達(dá)產(chǎn)物,，則說明兩者之間存在相互作用,。效應(yīng)，否則兩者之間不存在交互作用,。該技術(shù)可用于微定量和陣列后的大規(guī)模蛋白質(zhì)相互作用研究,。在實(shí)際工作中，根據(jù)需要又開發(fā)出了一混合系統(tǒng),、三混合系統(tǒng)和反混合系統(tǒng),。安格邁爾等人。設(shè)計(jì)了 SOS 蛋白介導(dǎo)的雙雜交系統(tǒng),?？梢匝芯磕さ鞍椎墓δ埽S富了酵母二雜交系統(tǒng)的功能,。此外,，酵母二雜交系統(tǒng)的作用也已擴(kuò)展到蛋白質(zhì)的鑒定。

2. 噬菌體展示技術(shù)

單克隆抗體的 DNA 序列與編碼噬菌體外殼蛋白的基因相連,。當(dāng)噬菌體生長時(shí),，相應(yīng)的單克隆抗體在表面表達(dá),，然后噬菌體通過柱。如果柱中含有目標(biāo)蛋白,，它將特異于相應(yīng)的抗體,。結(jié)合起來，這稱為噬菌體展示技術(shù),。這項(xiàng)技術(shù)也主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用,。它不僅具有高通量、簡單的特點(diǎn),，還具有直接獲取基因,、高選擇性篩選復(fù)雜混合物、通過篩選過程中適當(dāng)改變條件直接評價(jià)相互作用等優(yōu)點(diǎn),。結(jié)合的特異性,。目前，利用優(yōu)化的噬菌體展示技術(shù),，展示了人和小鼠兩種特殊細(xì)胞系的cDNA文庫,，分離出了人上皮生長因子信號通路中的信號分子。

3. 等離子共振技術(shù)

表面等離子共振（SPR）已成為蛋白質(zhì)相互作用研究的新方法,。其原理是利用納米級薄膜吸附“餌料蛋白",。當(dāng)待測蛋白與誘餌蛋白結(jié)合時(shí)，薄膜的共振特性會發(fā)生變化,，通過檢測即可得知兩種蛋白的結(jié)合情況,。 SPR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是不需要標(biāo)記或染料，并且可以實(shí)時(shí)監(jiān)控反應(yīng)過程,。該檢測快速,、安全，還可用于檢測蛋白質(zhì)-核酸和其他生物大分子的相互作用,。

4. 熒光能量轉(zhuǎn)移技術(shù)

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）廣泛用于研究分子間距離及其相互作用；與熒光顯微鏡相結(jié)合,，可以定量獲得生物體中蛋白質(zhì),、脂質(zhì)、DNA和RNA的時(shí)空信息,。隨著綠色熒光蛋白（GFP）的發(fā)展,，F(xiàn)RET熒光顯微鏡有潛力實(shí)時(shí)測量活細(xì)胞中分子的動態(tài)特性。提出了一種定量測量 FRET 效率和供體與受體之間距離的簡單方法,，僅使用一組濾光片并測量比率,，利用供體和受體的發(fā)射光譜來消除光譜串?dāng)_。該方法簡單快速,，可以實(shí)時(shí)定量測量FRET效率和供受體距離,，特別是對于基于 GFP 的供體-受體對,。

5. 抗體和蛋白芯片技術(shù)

蛋白質(zhì)芯片技術(shù)的出現(xiàn)給蛋白質(zhì)組學(xué)研究帶來了新的思路。蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主要內(nèi)容之一是研究不同生理狀態(tài)下蛋白質(zhì)水平的數(shù)量變化,。小型化,、集成化、高通量的抗體芯片是一個(gè)非常好的研究工具,，也是芯片中發(fā)展最快的芯片,。而且技術(shù)已經(jīng)越來越成熟。其中一些抗體芯片已經(jīng)開發(fā)用于臨床應(yīng)用,，例如腫瘤標(biāo)志物抗體芯片,，還有許多已經(jīng)應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。

6. 免疫共沉淀技術(shù)

免疫共沉淀是主要用于研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù),。金黃色葡萄球菌蛋白A（SPA）,，如果細(xì)胞內(nèi)有靶蛋白與目的蛋白結(jié)合，就可以形成這樣的復(fù)合物：“靶蛋白-目的蛋白-抗目的蛋白抗體-SPA\|Pansobin" ",，由于 SPA\|Pansobin 相對較大,，因此在離心過程中復(fù)合物被分離出來。通過變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離復(fù)合物的四種成分,。然后,，通過Western blotting方法，使用抗體檢測目標(biāo)蛋白是什么以及是否是預(yù)測蛋白,。該方法獲得的目的蛋白與細(xì)胞內(nèi)的目的蛋白自然結(jié)合,，符合體內(nèi)實(shí)際情況，獲得的蛋白可靠性高,。但這種方法有兩個(gè)缺點(diǎn)：一是兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接的,，而是有第三方充當(dāng)中間的橋梁；二是實(shí)驗(yàn)前必須對目標(biāo)蛋白進(jìn)行預(yù)測,，以選擇最終的檢測抗體,，因此如果預(yù)測不正確，實(shí)驗(yàn)就不會得出結(jié)果,，而且方法本身也存在風(fēng)險(xiǎn),。

7、Pull-down技術(shù)

蛋白質(zhì)相互作用有兩種類型：牢固相互作用和瞬時(shí)相互作用,。強(qiáng)相互作用在多亞基蛋白質(zhì)復(fù)合物中很常見,，最好通過免疫共沉淀 (Co-IP)、Pull-down 技術(shù)或 Far-western 方法進(jìn)行研究,。 Pull-down 技術(shù)使用固定的,、標(biāo)記的誘餌或標(biāo)簽蛋白（生物素、PolyHis 或 GST）從細(xì)胞裂解物中撈出相互作用的蛋白質(zhì)。 Pull-down技術(shù)可以確定已知蛋白質(zhì)與提取的蛋白質(zhì)或純化的相關(guān)蛋白質(zhì)之間的相互作用,，并從體外途徑或翻譯系統(tǒng)檢測蛋白質(zhì)相互作用,。