將有機底物酶促轉(zhuǎn)化為深色,、不溶性反應(yīng)產(chǎn)物被廣泛用作免疫組織化學(xué)中的檢測方法[1]，并且也已用于原位雜交檢測[2],。盡管應(yīng)用廣泛,，但它并不適合所有應(yīng)用。產(chǎn)品的擴散可能會限制分辨率,，并且染色的連續(xù)性可能會掩蓋底層的細(xì)胞結(jié)構(gòu),。與其他細(xì)胞染色劑的對比度可能低于預(yù)期，最近開發(fā)的鎳基增強試劑已經(jīng)解決了這個問題,，該試劑與二氨基聯(lián)苯胺反應(yīng)產(chǎn)物結(jié)合,，產(chǎn)生較暗的信號[3]。某些應(yīng)用還需要比直接酶染色更高的靈敏度；這通常是通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等擴增方法 [4] 或半抗原化底物（例如生物素化酪胺）的催化沉積來實現(xiàn)的[5],。然而,，這大大增加了程序的長度和復(fù)雜性，并且還可能受到擴增產(chǎn)物的擴散的影響,。
我們發(fā)現(xiàn),，在適當(dāng)?shù)慕饘僭春突罨瘎┐嬖诘那闆r下，辣根過氧化物酶綴合的探針可以選擇性地沉積金屬,，從而產(chǎn)生黑色的,、高度局部化的染色。圖 1-4 所示結(jié)果顯示了新型金相基質(zhì)與傳統(tǒng) DAB 開發(fā)在人類乳腺癌中的比較,。將石蠟切片在二甲苯中脫蠟,、水合并使用蒸汽熱進行 HIER（抗原修復(fù)）30 分鐘。用3% H 2 O 2封閉內(nèi)源性過氧化物酶后溶液5分鐘,，切片與一抗孵育30分鐘,，隨后與Envison檢測試劑盒(Dako Corp)孵育30分鐘。對照（圖 1 和 3）用 DAB 顯色劑染色 5 分鐘,，并用蘇木精復(fù)染 2 分鐘,；實驗切片（圖 2 和 4）用金相基質(zhì)處理 7-8 分鐘,，并用甲基綠復(fù)染,。與 DAB 相比,，染色的點狀性質(zhì)和非常低的背景結(jié)合程度是顯而易見的,。該方法還被發(fā)現(xiàn)對原位雜交檢測高度敏感（圖 5），并且在平行免疫印跡中產(chǎn)生的染色比 DAB 染色深得多（圖 6）,。
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圖 1 和圖 2：對乳腺浸潤性導(dǎo)管癌進行黃體酮受體（單克隆抗體 PR-88）染色，然后進行 (1) DAB 或 (2) 酶金相分析（條 = 50 微米）。
圖 3 和 4：乳腺導(dǎo)管內(nèi)粉刺癌,，使用多克隆 c-erb-B2 一抗對 Her 2/neu 進行染色，然后進行 (3) DAB 或 (4) 酶金相分析（條 = 25 m）,。
圖5：中等擴增對照細(xì)胞系（4-6個拷貝）中Her-2/neu的原位雜交檢測,；每個點對應(yīng)于該基因的一次出現(xiàn)。使用鏈霉親和素,、辣根過氧化物酶和金屬沉積混合物檢測的生物素化探針（放大倍數(shù) x 1,000）,。
圖 6：（上）使用辣根過氧化物酶的新金相底物開發(fā)的免疫印跡。將2微克HRP沉積到硝化纖維素上,，用4％BSA封閉,，然后用金相基質(zhì)處理； （底部）使用標(biāo)準(zhǔn) DAB 開發(fā)的相同目標(biāo),。
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