如何準備條件培養(yǎng)基樣品
我們建議準備無血清或低血清培養(yǎng)基樣品,，因為血清往往含有可能產(chǎn)生顯著背景信號的細胞因子。如果需要測試含有血清的培養(yǎng)基,，我們建議還運行未培養(yǎng)的培養(yǎng)基空白來評估基線信號,。然后可以從培養(yǎng)基樣本數(shù)據(jù)中減去該基線。
第 0 天,，在含有完quan培養(yǎng)基的 100 mm 組織培養(yǎng)板中接種約 100 萬個細胞,。*
第3天，除去培養(yǎng)基并用6-8ml無血清或低血清培養(yǎng)基（例如含有0.2%小牛血清的培養(yǎng)基）替換培養(yǎng)基,。
第 5 天,，將培養(yǎng)基收集到 15 ml 管中。在 4℃ 的離心機中以 2,000 rpm 的速度離心 10 分鐘,。保存上清液,。將上清液轉(zhuǎn)移至 1.5 ml Eppendorf 管中。將上清液儲存在-80°C 直至實驗,。大多數(shù)樣品可以通過這種方式保存至少一年,。
*最佳接種細胞數(shù)量因細胞類型而異，可能需要憑經(jīng)驗確定,。
注意：如果需要進行后續(xù)實驗，強烈建議在制備后對所有樣品進行分裝,，大程度地減少多次凍融循環(huán)導(dǎo)致的細胞因子降解,。
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