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用    途：用于牛血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中α1-微球蛋白(α1-MG)測定。

工作原理

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)水平,。向預先包被了牛α1-微球蛋白(α1-MG)單克隆抗體的酶標孔中加入牛α1-微球蛋白(α1-MG),，溫育；溫育后,，加入生物素標記的抗α1-微球蛋白(α1-MG)抗體,。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復合物,，再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A,、B,，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺與樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)的濃度呈正相關(guān),。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1． 37℃恒溫箱。

2． 標準規(guī)格酶標儀,。

3． 精密移液器及一次性吸頭

4． 蒸餾水,，

5． 一次性試管

6． 吸水紙

注意事項

1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2． 各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差

3． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

4． 為避免交叉污染,，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜,。

5． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。

6． 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次,。

自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融,。

操作程序

1. 標準品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。)

2. 根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加樣：1）空白孔,，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗α1-MG抗體,，鏈霉親和素-HRP,，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同,；2）標準品孔：加入標準品50ul,，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,，故不加),；3）代測樣品孔：加入樣本40ul,，然后各加入抗α1-MG抗體10ul,、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜,，輕輕震蕩混勻,，37℃溫育60分鐘,。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

8. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行,。

9. 根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算,。

操作程序總結(jié)：

1.準備試劑,，樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品，生物素標記的二抗和酶標試劑,，37℃反應60分鐘

3.洗板5次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色15分鐘

4.加入終止液

5.10分鐘內(nèi)讀OD值

6.計算

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上,。

2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和15%

檢測范圍：

檢測范圍：150ng/L - 4800ng/L

保存條件及有效期：

保存：2-8℃。

有效期：6個月(2-8℃),。