1、為什么MACS磁珠分選要使用分選柱,？
• 磁珠可以更?。好捞祆淮胖橹睆街挥?0nm，普通真核細(xì)胞直徑一般大于10um,，結(jié)合在細(xì)胞上的磁珠大小可以忽略不計(jì),，因此：1、攜帶的磁珠不影響細(xì)胞大小——可以直接上流式檢測,，不影響FSC數(shù)據(jù)收集,；2、細(xì)胞功能不受影響——分選過程中,，磁珠的結(jié)合不會引起細(xì)胞的活化及其它生理狀態(tài)的改變,，可以保持細(xì)胞的原始生理和功能狀態(tài)，尤其在Naive免疫細(xì)胞的分選中尤為重要,。
• 抗原表位的占據(jù)更少：因?yàn)榇艌隹梢员环诌x柱放大1000-10000倍,，所以不需要太多的磁珠結(jié)合即可分離不同細(xì)胞。約20%-30%的抗原表位被偶聯(lián)了磁珠的抗體結(jié)合即可將細(xì)胞滯留在磁場中,，這就為后續(xù)實(shí)驗(yàn)預(yù)留了足夠的抗原表位,，因此，對于表達(dá)水平不低的抗原來說,，MACS磁珠分選后的細(xì)胞可以直接進(jìn)行相關(guān)熒光抗體標(biāo)記,，進(jìn)而進(jìn)行流式檢測。
• 細(xì)胞活力更好：通過分選柱引起的間接磁場放大,，使得細(xì)胞在磁場中所承受的直接壓力小,，讓細(xì)胞受力均勻；同時,，通過分選柱放大的磁場可以瞬時變大,、離開磁場后磁力又瞬間消失，這些都保證了細(xì)胞所受機(jī)械力小，損傷小,，得到的細(xì)胞活力高,。
• 細(xì)胞純度更高：通過去除分選柱，可以更好的進(jìn)行去除分選,，提高目的細(xì)胞的純度,。
2、是不是所有細(xì)胞都要從分選柱上重新獲??？
不是。
若使用陽性分選策略,，目的細(xì)胞是磁性標(biāo)記的,，在分選器和分選柱產(chǎn)生的磁場中滯留后，當(dāng)分選柱移出分選器,，磁場瞬間消失,，此時用活塞用力將分選柱中滯留的細(xì)胞推出，從而收集到目的細(xì)胞,；
反之,，若使用去除分選策略，此時目的細(xì)胞是非磁性標(biāo)記的,，可直接從洗脫液中獲得,。
3、MACS分選柱有哪幾種,，如何選擇合適的分選柱,？
MACS分選柱根據(jù)其細(xì)胞容量、用途可以分為幾種：
MS,、LS,、LD、大細(xì)胞分選柱,、全血分選柱,、autoMACS分選柱以及用于生物大分子分離的u柱等，選擇分選柱時要根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)策略和注重的實(shí)驗(yàn)效果來取舍，我們在之前的一期微信“如何選擇恰當(dāng)?shù)姆诌x柱"中有詳細(xì)的說明,。
4,、MACS分選柱能否重復(fù)使用？
普通的MACS分選柱不建議重復(fù)使用,，但autoMACS分選柱分可以重復(fù)使用,。
重復(fù)使用不能保證無菌，MACS分選柱都是獨(dú)立、無菌包裝的,，保證分選下來的細(xì)胞無污染,；
分選柱內(nèi)填充了經(jīng)親水包被層處理的鐵珠，如果通過浸泡,、洗滌等過程重復(fù)使用,，那么，鐵珠表面得親水層被破壞,，裸露的鐵珠與細(xì)胞接觸會對流經(jīng)的細(xì)胞產(chǎn)生損失,，影響細(xì)胞活力和分選效果。
5,、那為什么autoMACS分選柱可以重復(fù)使用呢,？
autoMACS分選柱可以在兩周之內(nèi)使用，且最多用100次,。
autoMACS分選柱一旦安裝到全自動分選儀上,，須保存在液體中，防止分選柱中的填充基質(zhì)被氧化無法使用,。
每次使用后應(yīng)該按照推薦程序進(jìn)行沖洗和消毒,，以便更好的保存和下一次使用。
6,、全血分選柱與普通分選柱有何不同,？
全血分選柱有兩層特殊的基質(zhì)，非磁性層和磁性層,；普通細(xì)胞分選柱中填充的是均一的親水包被層處理的鐵珠,；
全血分選柱柱容量為15ml的全血；
全血分選柱可用于直接從全血中分選細(xì)胞,，無需進(jìn)行紅細(xì)胞裂解或者密度梯度離心的過程,，無需先制備PBMC。
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