很多時(shí)候,,進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染的研究人員必須進(jìn)行謹(jǐn)慎的平衡,。實(shí)現(xiàn)足夠高的轉(zhuǎn)染水平以提供可靠的結(jié)果,同時(shí)又不在此過程中殺死太多細(xì)胞,,是一項(xiàng)持續(xù)的斗爭,。對于從事干細(xì)胞研究的科學(xué)家來說,這些問題更具挑戰(zhàn)性,,因?yàn)樗鼈兊霓D(zhuǎn)染率歷來較低(通常低于5%),。
許多科學(xué)家現(xiàn)在正在尋求利用干細(xì)胞進(jìn)行基于CRISPR的基因編輯,以在細(xì)胞水平上對疾病產(chǎn)生新的理解,。有一種高效可靠的方法來轉(zhuǎn)染干細(xì)胞,,以實(shí)現(xiàn)基因組編輯的新發(fā)現(xiàn),這一點(diǎn)從未如此重要?,F(xiàn)在非常需要針對CRISPR應(yīng)用優(yōu)化干細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案,。允許干細(xì)胞維持其多能狀態(tài)并最大限度地減少轉(zhuǎn)染的細(xì)胞毒性的方案至關(guān)重要。
我們的支鏈兩親性肽膠囊(BAPC™)克服了脂質(zhì)體載體的問題,,有助于最大限度地減少轉(zhuǎn)染干細(xì)胞的壓力,。這與誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)尤其相關(guān),它們對環(huán)境變化非常敏感,,對壓力反應(yīng)不佳,。
將熒光激活細(xì)胞分選 (FACS) 分選的干細(xì)胞(輻射敏感細(xì)胞)培養(yǎng) 6 小時(shí),并與 BAPC 和 Atto 633 一起孵育過夜。然后用固定在 4% FFA 中的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,。 DMSO 處理的細(xì)胞用作陰性對照,。在上圖中,比例尺代表 10 微米,,白色箭頭代表 BAPC 陽性細(xì)胞,。
Phoreus™ BAPtofect™-25 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒最大限度地減少了干細(xì)胞轉(zhuǎn)染的壓力。由于 BAPC 是由合成的,、天然存在的肽構(gòu)成的,,它們是自組裝的、水溶性的,、對細(xì)胞無毒,,并且不會(huì)觸發(fā)免疫系統(tǒng)反應(yīng)。
Phoreus目前正在與行業(yè)合作伙伴合作開發(fā)iPSC干細(xì)胞轉(zhuǎn)染的新方案,。 雖然這項(xiàng)初步工作已經(jīng)成功地證明了干細(xì)胞對染色BAPC的有效吸收,,但目前正在進(jìn)行研究,以證明核酸的保護(hù)遞送導(dǎo)致干細(xì)胞成功轉(zhuǎn)化,。這些新協(xié)議將促進(jìn)CRISPR Cas-9的遞送,,并指導(dǎo)RNA用于干細(xì)胞中的基因編輯,從而在細(xì)胞水平上對疾病產(chǎn)生令人興奮的新理解,。
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