定量 NMR (qNMR) 使用核磁共振波譜來量化化學(xué)物質(zhì),，即確定它們在溶液中的濃度,。當然，NMR 被認為是一種強大的結(jié)構(gòu)分配工具,，可用于確定化學(xué)物種的身份,，但它也可用于通過適當設(shè)計的實驗進行準確的定量測量。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn),，定量 NMR 是一種有價值的分析測定工具,，即藥物參考標準品的準確純度測量。
定量 NMR (qNMR) 使用來自核磁共振光譜的數(shù)據(jù),，即 NMR 峰的面積或積分，來確定溶液中分子的濃度,。在選定的儀器條件下,，積分與相應(yīng)信號的核數(shù)和底物濃度成正比。這適用于所有分子,。因此,，qNMR 優(yōu)于其他定量技術(shù)，例如紫外-可見檢測,，后者的響應(yīng)往往是化合物特異性的,。質(zhì)子核磁共振實驗是最常見的，但其他原子核如磷 ( 31 P) 或氟 ( 19F) 也可用于 qNMR,?；衔锉仨毦哂?NMR 活性核苷，它對感興趣的分析物具有特異性,。可以通過使用外部或內(nèi)部校準標準來實現(xiàn)定量,。
定量 NMR 已用于簡化參考物質(zhì)的總體純度測定,。 qNMR 可以通過直接測量分析物的量來替代質(zhì)量平衡方法。 qNMR 純度測定方法已被藥典采用,，如 USP 通則 <761> 中所述,。
為了在定量 NMR 中使用,，選擇適合測定測定的內(nèi)部校準標準,。用于定量的標準 NMR 信號不得與來自分析物的信號重疊而產(chǎn)生干擾。內(nèi)標還必須具有足夠的溶解度,，不得與分析物發(fā)生反應(yīng),，還應(yīng)具有高純度,。質(zhì)子 NMR 的示例內(nèi)標 (IS) 是馬來酸、1,2,4,5-四氯苯,、1,4-二硝ji苯或苯甲酸芐酯,。下表給出了它們的 NMR 特征的總結(jié)。
在用于測定分析物的 NMR 實驗中,，使用準確重量的樣品和內(nèi)標,。此外，應(yīng)考慮關(guān)鍵的 NMR 參數(shù),，即為靈敏度選擇的掃描次數(shù),，以及使用弛豫延遲以確保信號在脈沖之間弛豫。還建議采用自動積分并使用復(fù)制樣品制備進行精確度評估,。
使用以下等式計算 qNMR 實驗的測定百分比：
我們使用qNMR來確定Acanthus研究公司許多參考標準產(chǎn)品的純度。一個例子是藥物雜質(zhì)參考標準品：克林霉素2-磷酸亞砜異構(gòu)體A（CLI-15-005-A）,，它是克林霉素磷酸活性成分的相關(guān)化合物,。該標準品尋求直接通過qNMR測定純度。用于測定選擇的內(nèi)標是馬來酸,。如克林霉素2-磷酸亞砜異構(gòu)體A和馬來酸混合物的NMR波譜所示,，6.3 ppm處的IS信號與分析物信號不重疊。測定中使用0.87ppm的甲基信號,。制備克林霉素2-磷酸亞砜異構(gòu)體A和內(nèi)標一式三份樣品,，溶解在DMSO-d6中。qNMR結(jié)果總結(jié)如下,。
如上所示，克林霉素 2-磷酸亞砜異構(gòu)體 A 的 % 測定結(jié)果顯示出良好的精密度,，三次重復(fù)測定的 % RSD 為 0.1%,。 90.9% 的平均 % 測定值用作一定純度。如熱重分析所示,，該結(jié)果與該標準中水含量約為 10% 的事實一致,。
克林霉素 2-磷酸亞砜異構(gòu)體 A 的核磁共振分析證明了定量核磁共振在參考標準品純度測定中的實用性。
與 HPLC 分析相比,，定量 NMR 在純度測定方面具有多項優(yōu)勢。主要優(yōu)點是 qNMR 可直接測量純度,。 HPLC 的色譜純度可能會高估樣品的整體純度,，因為它沒有檢測到所有物質(zhì)，例如殘留溶劑或水。此外,，qNMR 避免了在 HPLC 中經(jīng)常觀察到的分析物與雜質(zhì)響應(yīng)的依賴性,。此外，HPLC-UV檢測不能應(yīng)用于缺乏發(fā)色團的物質(zhì),。
隨著越來越多的行業(yè)用戶認識到這種分析方法具有很大的實用性和易用性，人們對用于分析的定量 NMR 的興趣正在增長,。在藥物研發(fā)過程中,，HPLC 和 GC 等色譜技術(shù)是廣泛使用的分析技術(shù)。然而,，他們的方法開發(fā)非常耗時,。使用 qNMR 可以通過減少準備和分析時間來提高效率。 qNMR 也是環(huán)保的,，因為它減少了溶劑的使用和廢物的產(chǎn)生,。看來 qNMR 分析將擴大其在制藥和相關(guān)行業(yè)中的作用,。
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