準備注意事項
ProTrap XG 設(shè)備經(jīng)過優(yōu)化,，可處理 50 μg 蛋白質(zhì),。
對于可重現(xiàn)和最大的蛋白質(zhì)沉淀，沉淀過程中樣品中的最大SDS含量應(yīng)為1%,。如果您的提取或裂解緩沖液含有超過 1% SDS,，請使用最大離子強度為 300 mM 的緩沖液稀釋。
離心速度基于帶 24 x 1.5/2.0 mL 轉(zhuǎn)子的標準臺式微量離心機,。
提供的時間僅供參考。
如果過濾濾芯中殘留的液體超過幾微升,，請將其返回到離心機并重復旋轉(zhuǎn),，或考慮提高旋轉(zhuǎn)速度。建議在后續(xù)旋轉(zhuǎn)中使用 3000 ×g （6000 rpm）,，ProTrap XG 已經(jīng)過高達 9000 ×g （10,，000 rpm） 的測試。
所需材料
所有化學品和試劑應(yīng)為ACS級/HPLC級或更高,。
丙酮
5 M 氯化鈉水溶液
80%甲酸水溶液（冷卻至–20°C）
冷凍水
自上而下的樣品制備方案
對于可重現(xiàn)和最大的蛋白質(zhì)沉淀,，沉淀過程中樣品中的最大SDS含量應(yīng)為1%。如果您的提取或裂解緩沖液含有超過 1% SDS,，請使用最大離子強度為 300 mM 的緩沖液稀釋,。 為獲得最佳體驗，樣品應(yīng)至少含有 50 mM NaCl,。 如果需要添加氯化鈉,，請使用 5 M 氯化鈉溶液。
不要讓過濾濾芯中的膜在步驟之間變干,。
將塞子擰到濾芯的底座上,。
將 100 μL 稀釋的樣品蛋白轉(zhuǎn)移到堵塞的過濾柱中。
加入 400 μL 室溫丙酮。
蓋上過濾濾芯并輕輕搖晃,，傾斜不超過 45°,，以混合溶劑。
將過濾柱插入微量離心管中,，等待 30 分鐘,，使蛋白質(zhì)在室溫下聚集。
連接塞子后,，以 2500 × g （5000 rpm） 離心×2 分鐘,。
從微量離心管中取出過濾盒，倒置并擰下塞子,。
將帶蓋的過濾柱放回微量離心管中,，并以 500 × （2000 rpm） 離心×3 分鐘。 丟棄通過溶劑的流量,。 如果過濾濾芯中殘留任何溶劑,，請以 3000 ×g （6000 rpm） 的速度重新旋轉(zhuǎn)裝置 2-5 分鐘。
用 400 μL 丙酮清洗蛋白質(zhì)顆粒,。立即以 500 × g (2000 rpm) × 2 分鐘離心,。丟棄流過洗滌溶劑的流。
更換插頭,。在 –20°C 下將過濾筒中的沉淀物冷卻 10 分鐘,。
在水中加入 50 µL 冷 (-20°C) 80% 甲酸。蓋上濾芯,，放入冰箱 10 分鐘,，然后超聲處理 1 分鐘。
加入 450 µL 冷凍水,；蓋并渦旋以混合溶劑,。
完整的蛋白質(zhì)可以在干凈的微量離心管中直接回收，以 350 × g (2000 rpm) × 5 分鐘的速度離心,。
如果需要進一步的蛋白質(zhì)凈化,，再溶解的蛋白質(zhì)也可以使用提供的可選 SPE 小柱和 SPE蛋白質(zhì)/肽凈化方案進行 SPE 。
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