細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源基因如DNA,，RNA等導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的技術(shù),。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制細(xì)胞基因功能,、實(shí)現(xiàn)基因調(diào)控的常規(guī)工具,。市場(chǎng)上各種轉(zhuǎn)染試劑琳瑯滿目，各有千秋,，然而沒(méi)有任何一種轉(zhuǎn)染試劑可以能夠適用于所有細(xì)胞種類,、滿足所有實(shí)驗(yàn)需求和目的，成分控認(rèn)為轉(zhuǎn)染試劑的成分及作用機(jī)理對(duì)轉(zhuǎn)染效果及細(xì)胞生理作用影響顯著,，是轉(zhuǎn)染試劑選擇的重要依據(jù),，選試劑時(shí)要留意成分。
嚴(yán)格來(lái)講,，轉(zhuǎn)染的方法可以基于化學(xué)法,、物理法(電穿孔、顯微注射等)以及病毒介導(dǎo)法,，沒(méi)有一種方法是放之四海而皆準(zhǔn),。作為成分控的小編，本次主要為大家介紹基于各類轉(zhuǎn)染試劑的化學(xué)法轉(zhuǎn)染,。
基于磷酸鈣成分的轉(zhuǎn)染試劑,，其主要作用原理是與DNA通過(guò)沉淀反應(yīng)形成磷酸鈣-DNA復(fù)合物，粘附到細(xì)胞膜表面,，借助內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),。pH值，鈣離子濃度，DNA濃度,，沉淀時(shí)間,，細(xì)胞孵育時(shí)間乃至各組分加入順序都可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，因此實(shí)驗(yàn)條件摸索和優(yōu)化時(shí)間較長(zhǎng),，且重復(fù)性不佳,。
基于脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽(yáng)離子脂質(zhì)體兩種。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi),。目前應(yīng)用比較廣泛的是帶正電的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，DNA并沒(méi)有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,，而是帶負(fù)電 的DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物,，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面,，經(jīng)過(guò)內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。此方法操作簡(jiǎn)單,，重復(fù)性好,，在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但具有一定的細(xì)胞毒性,，可能會(huì)干擾細(xì)胞的代謝,。且活性受血清影響，需要去除血清,。
基于陽(yáng)離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑,，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,。其又分為樹(shù)枝狀陽(yáng)離子聚合物和線性陽(yáng)離子聚合物兩類,，前者細(xì)胞毒性相對(duì)較大，后者細(xì)胞毒性較小,，但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，適用也較為廣范。
以上單一成分的轉(zhuǎn)染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細(xì)胞毒性,，可謂魚(yú)和熊掌不可兼得也,。
會(huì)員.png)
5
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)