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NOVOCIB的細(xì)菌熒光素酶是從我們團(tuán)隊(duì)從魷魚(yú)中分離的磷光桿菌菌株中純化出來(lái)的，并因其最亮的發(fā)光而被選擇,。通過(guò)PCR擴(kuò)增luxab基因并進(jìn)行克隆,。克隆的α和β亞基序列與發(fā)光桿菌的P24113和P12744蛋白（SwissProt Entry） 具有94%和92%的同一性,。

應(yīng)用：在發(fā)光海洋光細(xì)菌中,，光的產(chǎn)生是由兩個(gè)連續(xù)反應(yīng)產(chǎn)生的。第一個(gè)由 NAD(P)H-FMN 氧化還原酶 (EC 1.6.8.1) 催化,，產(chǎn)生 FMNH ₂作為第二個(gè)反應(yīng)的底物,，該反應(yīng)由熒光素酶 (EC 1.14.14.3) 催化，在脂肪醛和分子氧存在的情況下產(chǎn)生光,。在 NADH 底物濃度有限的情況下,，光強(qiáng)度與 NAD(P)H 濃度成正比。細(xì)菌熒光素酶與 FMN-NAD(P)H 氧化還原酶的偶聯(lián)已用于提供超靈敏的分析工具,，用于定量 NAD(P)H 以及 NADH,、NADPH 依賴性酶的底物（例如葡萄糖、乳酸,、蘋(píng)果酸,、乙醇、山梨醇,、草酰乙酸）⁽¹⁾,。

NOVOCIB的高純細(xì)菌熒光素酶可用于 NAD(P)H 定量或脫氫酶偶聯(lián)測(cè)定。

活性：在 10M NADH 和3.5mU /ml FMN 還原酶（參考 E-Nov-8）存在的情況下,，使用 Optocomp 1 (Celsis) 測(cè)量,，每秒每克蛋白質(zhì) > 500,000 (5.10 5 ) RLU ) 光度計(jì)。 純度：通過(guò)10% AA SDS-PAGE控制,。

圖 1：使用高純細(xì)菌熒光素酶（50μg/ml,，NovoCIB，E-Nov 10）獲得的 NADH 校準(zhǔn)曲線（雙對(duì)數(shù)圖） ,。 測(cè)定條件：向含有0.1M KH 2 PO 4 pH=6.9,、0.02%十二醛,、50μM FMN、2mg/ml BSA的200μL孔中添加NADH（5μL）后測(cè)量發(fā)光信號(hào)（15秒） ,。在 Optocomp 1 (Celsis) 光度計(jì)中跟蹤反應(yīng),。

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