實(shí)驗(yàn)前：

　　1.對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿的準(zhǔn)備：對(duì)玻璃器皿進(jìn)行清洗,，將洗凈干燥的平皿,、乳缽、刻度吸管等用牛皮紙包裹,，放入鼓風(fēng)干燥箱中于160℃干熱滅菌2小時(shí)或放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘,，備用。

　　2.對(duì)實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基及稀釋液的準(zhǔn)備：按規(guī)定比例配制實(shí)驗(yàn)所需的各種培養(yǎng)基及稀釋液,，包好,，放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘，備用,。

　　3.潔凈服的準(zhǔn)備：將當(dāng)天實(shí)驗(yàn)所用潔凈服放入高壓蒸汽滅菌柜于121℃濕熱滅菌30分鐘,，備用。
實(shí)驗(yàn)中：

　　1.將實(shí)驗(yàn)所需器皿,、培養(yǎng)基,、潔凈服、樣品、稀釋液放入相應(yīng)的傳遞窗中,，打開(kāi)紫外燈,，照射30分鐘。

　　2.打開(kāi)潔凈室的通風(fēng)設(shè)備1小時(shí)以上,，觀察潔凈室各個(gè)規(guī)定區(qū)域的壓差是否符合相應(yīng)規(guī)定范圍,，若不符合，則應(yīng)通知設(shè)備部門(mén)及時(shí)進(jìn)行調(diào)整,。

　　3.進(jìn)入潔凈室,，換上工作鞋，用洗手液洗手,，烘干,，換上潔凈服，戴上口罩,、手套,，并與噴手器下用75%乙醇或0.1%新潔爾滅對(duì)雙手進(jìn)行消毒。

　　4.進(jìn)入萬(wàn)級(jí)潔凈走廊,，觀察各個(gè)規(guī)定房間的溫度,、濕度、壓差是否符合規(guī)定,，并與傳遞窗中將經(jīng)紫外燈照射后的樣品,、器皿稀釋液及培養(yǎng)基，放入相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室(如微生物限度檢查室或無(wú)菌檢查室),。并將培養(yǎng)基的溫度控制在45℃以下(若培養(yǎng)基出現(xiàn)凝固現(xiàn)象時(shí),，因微波爐加熱融化;若溫度太高時(shí)，則應(yīng)用純化水降溫至不燙手背宜,。
5.打開(kāi)超凈工作臺(tái)的紫外燈,，照射30分鐘，然后再打開(kāi)超凈工作臺(tái)的通風(fēng)設(shè)備,。用75%乙醇或0.1%新潔爾滅對(duì)實(shí)驗(yàn)所用工作臺(tái)面進(jìn)行擦拭消毒(消毒時(shí)應(yīng)遵循由里到外,，由上到下,，由潔凈要求高到潔凈要求低的原則),。

　　6.按照適宜的次序于超凈工作臺(tái)內(nèi)擺放好稀釋液,、天平、消毒液,、集菌儀,、剪刀、鑷子等物品,，用75%酒精棉球進(jìn)行消毒,，將樣品內(nèi)包裝表面用碘酒棉球以及75%酒精棉球依次進(jìn)行消毒,。將營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板與超凈工作臺(tái)的左、中,、右各置一個(gè)(平板需經(jīng)下預(yù)培養(yǎng)48小時(shí)且無(wú)菌生長(zhǎng)),，開(kāi)蓋暴露30min，測(cè)定的沉降菌每平板不得超過(guò)1cfu,，則符合百級(jí)超凈工作臺(tái)的沉降菌標(biāo)準(zhǔn)(注：在潔凈工作臺(tái)進(jìn)行操作時(shí),，為防止污染，應(yīng)用酒精棉球?qū)﹄p手反復(fù)消毒),。

　　7.樣品處理(以采用離心薄膜過(guò)濾法為例)：　用天平稱(chēng)取規(guī)定量的樣品,，置于乳缽中，碾碎,，少量幾次加入規(guī)定量(用滅好菌的兩頭高量取)的稀釋液,，研磨均勻，以制備供試液,。8.細(xì)菌的檢查：用滅菌吸管吸取規(guī)定量的供試液于離心管中,，500轉(zhuǎn)/秒，離心3分鐘,。離心后用注射器吸取規(guī)定量的上清液于集菌儀中(集菌儀中的濾膜應(yīng)事先用少量的蛋白胨溶液進(jìn)行潤(rùn)洗),，再用規(guī)定量的蛋白胨溶液進(jìn)行反復(fù)沖洗(每次沖洗量不得超過(guò)100ml,，每張濾膜的總的沖洗量不得超過(guò)1000ml,，且沖洗過(guò)程中應(yīng)該保持濾膜的完整性)。并用等量的蛋白胨溶液制備陰性對(duì)照的濾膜,。