(一)操作室厭氧環(huán)境形成：
1.按使用要求放置好必要的附件和器具,；
2.通電源開照明燈,，開溫控儀,，調(diào)節(jié)所需溫度,；
3.操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,，并放入美蘭指示紙(封閉)；
4.關緊取樣室內(nèi)外門,，并抽真空校驗,；
5.操作室內(nèi)*次置換(氮氣置換)：
A.把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊
B.接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥1,，使手套鼓起,，關閉閥門1，然后扎緊袋口,；
6.操作室第二次置換(氮氣置換)重復一次充氮過程,，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣,。如此連續(xù)三次氮氣置換,。
7.操作室第四次置換(混合氣體置換)：
(混合氣體配比為N2 85%、H2 10%,、CO2 5%)
A.調(diào)換氣路打開混合氣閥3進氣,，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣,；
B.關掉混合氣體閥3,，并打開閥5，使混合氣體經(jīng)過流量計,，調(diào)整流量計,，流量為每分鐘10ml左右；
C.混合氣體重復2-3次轉換,，經(jīng)過上述過程,，基本形成厭氧環(huán)境。
8.操作室內(nèi)打開粑粒除氧劑,，接通除氧催化器電源進行催化除氧,，一小時后打開美蘭指示紙觀察其變*況，不變色為操作室內(nèi)達到厭氧環(huán)境,；
9.開紫外線滅菌燈,，室內(nèi)進行滅菌處理,，滅菌時間按具體實驗自定。
(二)菌種的置入和培養(yǎng)：
1.檢查取樣室內(nèi)門并關緊,；
2.打開取樣室外門,，將菌種放入取樣室后即關上外門；
3.取樣室充氮置換三次過程：打開真空泵,，先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,，然后人工打開氮氣閥2進氣，使指針回復零位,，關掉閥2,。第二次重復操作一次。第三次操作時,，使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,，然后打開閥4進混合氣，使指針回復零位,，關掉閥4,。取樣室充氮置換三次過程結束；
4.如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù),；
5.取樣室外門開啟,、關緊，再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)檢驗,；
6.厭氧培養(yǎng)箱需要長期連續(xù)使用的條件：
A.每天在操作室內(nèi)打開美蘭指示紙觀察,，如不正常就必須重新?lián)Q氣；
B.要長期連續(xù)輸入微量的混合氣體,，使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收,，保證室內(nèi)厭氧狀態(tài)，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右,；
C.連續(xù)培養(yǎng)運行一天,，更換一次除氧劑和干燥劑。
D.操作室內(nèi)溫度可任意選擇和控制,。
7.混合氣瓶,、氮氣瓶輸出壓力調(diào)整：調(diào)節(jié)減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右,。
注意事項
1.儀器盡可能地安裝于空氣清凈,、溫度變化較小的地方；
2.開機前應全面熟悉和了解各組成配套儀器,、儀表的使用說明,，掌握正確使用方法；
3.培養(yǎng)物放入必須是在操作室內(nèi)達到厭氧環(huán)境后放入,；
4.如發(fā)生故障(停氣等原因)操作室內(nèi)仍可保持10小時厭氧狀態(tài)(超過10小時則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理),；
5.經(jīng)常注意氣路有無漏氣現(xiàn)象,；
6.調(diào)換氣瓶時，注意要扎緊氣管,，避免流入含氧氣體,；
真空泵按要求使用，定期檢查加油.