好氧菌冷凍干燥管的制備

1,、安瓿管準(zhǔn)備

安瓿管材料以中性玻璃為宜,。清洗安瓿管時(shí)，先用2%鹽酸浸泡過夜,，自來水沖洗干凈后,，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后,、貼上標(biāo)簽,，標(biāo)上菌號及時(shí)間，加入脫脂棉塞后,，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用,。

2,、保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備

保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時(shí),，應(yīng)注意其濃度及pH值,，以及滅菌方法。如血清,，可用過濾滅菌,；牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂,，一般在100℃間歇煮沸2-3次,，每次10-30分鐘，備用,。

3,、凍干樣品的準(zhǔn)備

在適宜的培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期，進(jìn)行純度檢查后（參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術(shù)規(guī)程》（試行））,，與保護(hù)劑混合均勻,，分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于108-1010個(gè)/ml為宜（以大腸桿菌為例,，為了取得每毫升1010個(gè)活細(xì)胞菌液2毫升-2.5毫升,，只需10毫升瓊脂斜面兩支）。采用較長的毛細(xì)滴管,，直接滴入安瓿管底部,，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管,，裝量為半個(gè)球部,。若是液體培養(yǎng)的微生物，應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,，然后將培養(yǎng)物與保護(hù)劑混勻,，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時(shí)間盡量要短,，**在1-2小時(shí)內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍,。分裝時(shí)應(yīng)注意在無菌條件下操作。

4,、預(yù)凍

一般預(yù)凍2小時(shí)以上,，溫度達(dá)到-20℃到-35℃左右。

5,、冷凍干燥

采用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥,。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi)，開始冷凍干燥,，時(shí)間一般為8-20小時(shí),。

6、真空封口及真空檢驗(yàn)

將安瓿管頸部用強(qiáng)火焰拉細(xì),，然后采用真空泵抽真空,，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度,。

7,、保藏

安瓿管應(yīng)低溫避光保藏。

8,、質(zhì)量檢查

冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢查,，如存活率、生產(chǎn)能力,、形態(tài)變異,、雜菌污染等。