冷凍干燥機的應(yīng)用之微生物細菌的儲存方法

好氧菌冷凍干燥管的制備

1,、安瓿管準(zhǔn)備

安瓿管材料以中性玻璃為宜,。清洗安瓿管時，先用2%鹽酸浸泡過夜,，自來水沖洗干凈后,，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后,、貼上標(biāo)簽,，標(biāo)上菌號及時間，加入脫脂棉塞后,，121℃下高壓滅菌15-20分鐘,，備用。

2,、保護劑的選擇和準(zhǔn)備

保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇,。配制保護劑時，應(yīng)注意其濃度及pH值,，以及滅菌方法,。如血清，可用過濾滅菌,；牛奶要先脫脂,，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次,，每次10-30分鐘,，備用,。

3、凍干樣品的準(zhǔn)備

在適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,，進行純度檢查后（參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術(shù)規(guī)程》（試行））,，與保護劑混合均勻，分裝,。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜（以大腸桿菌為例,，為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升瓊脂斜面兩支）,。采用較長的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部,，注意不要濺污上部管壁,，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管,，裝量為半個球部,。若是液體培養(yǎng)的微生物，應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,，然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻,，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短,，**在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍,。分裝時應(yīng)注意在無菌條件下操作。

4,、預(yù)凍

一般預(yù)凍2小時以上,，溫度達到-20℃到-35℃左右。

5,、冷凍干燥

采用冷凍干燥機進行冷凍干燥,。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi)，開始冷凍干燥,，時間一般為8-20小時,。

6、真空封口及真空檢驗

將安瓿管頸部用強火焰拉細,，然后采用真空泵抽真空,，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度,。

7,、保藏

安瓿管應(yīng)低溫避光保藏。

8,、質(zhì)量檢查

冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標(biāo)檢查,，如存活率,、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異,、雜菌污染等,。

厭氧菌冷凍干燥管的制備

主要程序與需氧菌操作相同，注意保護劑的選擇和準(zhǔn)備,，保護劑使用前應(yīng)在100℃的沸水中煮沸15分鐘左右,，脫氣后放入冷水中急冷，除掉保護劑中的溶解氧,。

復(fù)蘇方法

先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部,，將安瓿管頂部燒熱，用無菌棉簽沾冷水,，在頂部擦一圈,，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,，敲下已開裂的安瓿管的頂端,，用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上,，進行適溫培養(yǎng),。