高鐵血紅蛋白（MetHb）測試盒 

一、實(shí)驗(yàn)儀器：試管,、微量移液器,、旋渦混勻器、可見分光光度計(jì)（540,、602和630nm）

二,、適用范圍：本試劑盒可測各種動物全血等樣本中高鐵血紅蛋白含量；

三,、測定意義：

體內(nèi)一氧化氮彌散入血后，很快與氧合血紅蛋白結(jié)合形成高鐵血紅蛋白（methemoglobin, MetHb）,，NO與MetHb變化相關(guān),，故全血MetHb檢測近年來受到臨床的廣泛重視。同時血液中高鐵血紅蛋白含量的測定對接觸芳香族氨基,、硝基化合物所引起的中毒性疾病的診斷與治療,，有重要的意義。

四,、試劑組成及配制：

     A.試劑一：血紅蛋白測定濃縮液,，1ml X 2支,2—8℃保存。

               血紅蛋白測定應(yīng)用液的配制：臨用前將濃縮液用雙蒸水1:99稀釋,，即100倍稀釋,，現(xiàn)用現(xiàn)配。配好的試劑2—8℃避光保存，可存放一個月以上,。

     B.試劑二: 高鐵血紅蛋白測定濃縮液,，30ml X 1瓶，2—8℃,。

              高鐵血紅蛋白測定應(yīng)用液的配制：  濃縮液:雙蒸水=1:9稀釋,，即10倍稀釋，可存放6個月以上,。

     C.試劑三：制作還原血紅蛋白曲線用

              ① 白色粉劑 X 1支,，2—8 ℃避光保存。

              ② 稀釋液,，1ml X 1支,，2—8 ℃保存。

              試劑三應(yīng)用液配制：臨用前每支粉劑加入1ml稀釋液,，現(xiàn)用現(xiàn)配,，注意避光。

     D.試劑四：制作高鐵血紅蛋白曲線用

              ① 磚紅色粉劑 X 1支,，2—8℃避光保存,。

              ② 稀釋液，1ml X 1支,，2—8℃保存,。

              試劑四應(yīng)用液配制：臨用前每支粉劑加入1ml稀釋液，現(xiàn)用現(xiàn)配,，注意避光

五,、操作過程：

1、制備抗凝全血：取全血立即加入到肝素抗凝管內(nèi),，加蓋封口,，輕輕顛倒混勻。

2,、血紅蛋白含量的測定：取 0.01ml 全血與 2.5ml 的 100 倍稀釋的試劑一應(yīng)用液（血紅蛋白測定應(yīng)用液）,，混勻，靜置5分鐘后,，1cm光徑,，雙蒸水調(diào)零，540nm處測定各管吸光度值,。

3,、高鐵血紅蛋白測定： 取0.05ml全血，加入2.5ml的試劑二稀釋應(yīng)用液（即高鐵血紅蛋白測定應(yīng)用液）,，混勻,，靜置5分鐘后，1cm光徑，雙蒸水調(diào)零,，測定630nm處及602nm處吸光度值,。如果沒有雙波長的分光光度計(jì)則可以先測定各管630nm處吸光度值，然后再測各管602 nm處吸光度值,。但一定要注意各管的編號不要弄錯,。

六、計(jì)算公式：

①,、血紅蛋白含量的計(jì)算：血紅蛋白克數(shù)/升=540nm處吸光度值×367.7

②,、高鐵血紅蛋白百分比計(jì)算： MetHb% = (A630nm—r x A602nm)÷(A602nm x(R— r)) ×100%

③、高鐵血紅蛋白含量的計(jì)算：高鐵血紅蛋白克數(shù) /升 = MetHb%×血紅蛋白克數(shù)/升

【注1】 A630即在630nm波長時樣本的吸光度值,；A602即在602nm波長時樣本的吸光度值

【注2】 R與r均為常數(shù),，R=1.81；r=0.14,。（本研究所測定常數(shù)）

即計(jì)算公式可以簡化為：

①,、高鐵血紅蛋白百分比： MetHb% = (A630nm—0.14×A602nm) ÷(A602nm ×1.67) ×100%

②、高鐵血紅蛋白含量的計(jì)算：高鐵血紅蛋白克數(shù)/升 = MetHb%×血紅蛋白克數(shù) /升

七,、注意事項(xiàng)：

①,、取血后應(yīng)在1小時內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)，否則影響測定結(jié)果,，因?yàn)榧t細(xì)胞中的還原酶可使高鐵血紅蛋白逐漸還原,，使結(jié)果降低。但可放-20℃以下冷凍保存,，如果血樣較多,，可將全血分成幾小管，每次測試可取其一小管,，每次測試可取其一小管,，余下各管仍保存-20℃以下以備重復(fù)測試，其結(jié)果不受影響,。

②,、本實(shí)驗(yàn)可用雙波長分光光度計(jì)測定，可同時測定602nm處及630nm處吸光度值,，進(jìn)行計(jì)算。也可用單波長分光光度計(jì)測定,，可以先測定各管630nm處吸光度值,，然后再測各管602nm處吸光度值。但一定要注意各管的編號不要弄錯,。

③如果實(shí)驗(yàn)室分光光度計(jì)沒有雙波長掃描功能,，可以不做標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接用本實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。R與r均為常數(shù),，R=1.81;r=0.14

④所用器皿要干凈,。

八、測定原理：

高鐵血紅蛋白在630nm波長處有一特征吸收峰,，而高鐵血紅蛋白（MetHb）和還原血紅蛋白（Hb）在602nm波長處光密度值相等,，利用此關(guān)系可以通過相應(yīng)的公式算出高鐵血紅蛋白含量。

高鐵血紅蛋白（MetHb）測試盒

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