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原理:
酶標抗體法,,又名酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),利用酶標記抗原或抗體以檢測相應(yīng)抗原或抗體的一種免疫學(xué)標記技術(shù),。其基本原理是使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,,并保持其免疫活性,而相對應(yīng)的抗體或抗原與某種酶連接成酶標抗體或抗原,,酶標抗體或抗原既保留了免疫活性可以與固相載體表面的抗原或抗體結(jié)合,,又保留了酶活性能夠以酶為檢測信號,加入酶反應(yīng)的底物后,,底物被酶催化為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與受檢抗體或抗原的量成比例,故可根據(jù)顏色深淺來定性或定量分析,。酶標抗體法具有靈敏性強,,特異性高,重復(fù)性好,,檢測速度快的特點,,尤其適用于大批量樣本檢測,是國際認可的標準化診斷方法,。
基本操作步驟:
包被—封閉—加樣—孵育一抗—洗滌—孵育二抗—洗滌—顯色—終止—讀數(shù)
分類:
依據(jù)檢測目的不同,,酶標抗體法有間接法,雙抗體夾心法,,競爭法和抗體捕獲法等,。
血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在,后者會干擾IgM抗體的測定,。因此測定IgM抗體多用捕獲法,。先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,去除IgG后再測定特異性IgM,。將抗IgM抗體連接在固相載體上,,洗滌后加入稀釋的血清標本,洗滌后加入特異性抗原,,洗滌后再加入酶標抗體,最后洗滌加底物顯色,。
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