詳細(xì)介紹
PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局
原則上分為四個(gè)區(qū)域:試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):
PCR實(shí)驗(yàn)室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū),、樣品制備區(qū),、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置,。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,,不能直通,,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗,。
PCR實(shí)驗(yàn)室區(qū)域的設(shè)置并不是一成不變的,,以下幾種情況需要說(shuō)明:
1.如果樣本在擴(kuò)增之前需要粉碎處理,則需要增加一個(gè)區(qū)域用于樣品的粉碎,。
2.如果采用實(shí)時(shí)熒光PCR法,,則擴(kuò)增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個(gè)區(qū)。
3.如果采用全自動(dòng)化PCR分析儀,,則標(biāo)本制備區(qū),、擴(kuò)增區(qū)和分析區(qū)可以合并為一個(gè)區(qū)。
前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū),,后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū),,擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)。實(shí)驗(yàn)材料,、試劑,、記錄紙、筆,、清潔材料等,,只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),即從試劑準(zhǔn)備區(qū),、樣品制備區(qū)到擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),,不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),,不得逆向流動(dòng),。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長(zhǎng)為254nm,,每20㎡一支40W的紫外燈,。
原則上的四大區(qū)域注意正壓負(fù)壓的控制:
1.試劑準(zhǔn)備區(qū):
主要進(jìn)行試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備,。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),,不得經(jīng)過(guò)其它區(qū)域,。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑,。本區(qū)主要設(shè)備有天平,、冰箱、離心機(jī),、加樣器,、振蕩器等。
對(duì)于氣流壓力的控制,,本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求,。
2.樣品制備區(qū):
主要進(jìn)行樣品的保存、核酸(RNA,、DNA)提取,、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱,、生物安全柜,、離心機(jī)、加樣器,、振蕩器,、恒溫水浴等。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,。
3.擴(kuò)增區(qū):
該區(qū)域的功能是DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測(cè)定。此外,,反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液和已制備的DNA模板(來(lái)自標(biāo)本制備區(qū))的加入等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行,。對(duì)于氣流壓力的控制,相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng),。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行,。
該區(qū)域的設(shè)備主要是核酸擴(kuò)增熱循環(huán)儀、加樣器,、超凈臺(tái)等,。其中熱循環(huán)儀的電源應(yīng)專用,并配備一個(gè)穩(wěn)壓電源或UPS,,以防止由于電壓的波動(dòng)對(duì)擴(kuò)增測(cè)定的影響主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增,。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。
4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):
擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定,。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī),、加樣器和水浴箱等,。
本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域,。
PCR無(wú)菌核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室 設(shè)計(jì)裝修——PCR無(wú)菌核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室 設(shè)計(jì)裝修