詳細(xì)介紹
一,、PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)原則
標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室一般分為4個(gè)區(qū)域:一區(qū)為試劑準(zhǔn)備區(qū),,二區(qū)為標(biāo)本制備區(qū),三區(qū)為PCR擴(kuò)增區(qū),,四區(qū)為產(chǎn)物分析區(qū),。
為避免交叉污染,進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,,即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),。各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過(guò)傳遞窗進(jìn)行,。
二、PCR實(shí)驗(yàn)室各分區(qū)介紹
2.1試劑準(zhǔn)備區(qū)(1區(qū))
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備,、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的制備,。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域,。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),,并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
房間的面積宜控制在15㎡~20㎡,。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)正壓狀態(tài),,以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,造成污染,。
2.2標(biāo)本制備區(qū)(2區(qū))
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存,、核酸(RNA、DNA)提取,、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成,。
標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25㎡~30㎡之間,。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外,,由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染,,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。
2.3 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)(3區(qū))
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增,。此外,,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。
擴(kuò)增室主要配備PCR實(shí)驗(yàn)室的核心儀器PCR儀,,在實(shí)驗(yàn)室建造過(guò)程中,,需要給PCR儀配備專門的UPS電源,以保證其正常工作,。該區(qū)面積控制在15㎡~20㎡,。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。為避免氣溶膠所致的污染,,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行,。建議采用≥10Pa壓差,,在控制上比較容易實(shí)現(xiàn)。
2.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)(4區(qū))
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定,。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,,因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。
在室內(nèi)配備通風(fēng)櫥,,保證房間內(nèi)的相對(duì)負(fù)壓,,空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)面積控制在15m2~20m2,。
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