PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)相對(duì)獨(dú)立,，盡量避免與其他普通實(shí)驗(yàn)室重疊或者有通道上的交叉,。區(qū)域與區(qū)域之間在物理空間上必須*獨(dú)立，各區(qū)域無(wú)論是空間上還是在使用中,，應(yīng)當(dāng)始終處于*的分割狀態(tài),，不能有空氣的直接相通。承接 疾控中心 醫(yī)院 PCR實(shí)驗(yàn)室 設(shè)計(jì)裝修

一,、PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)原則

標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室一般分為4個(gè)區(qū)域：一區(qū)為試劑準(zhǔn)備區(qū),，二區(qū)為標(biāo)本制備區(qū)，三區(qū)為PCR擴(kuò)增區(qū),，四區(qū)為產(chǎn)物分析區(qū),。

為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),。各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過(guò)傳遞窗進(jìn)行,。

 

二、PCR實(shí)驗(yàn)室各分區(qū)介紹

2.1試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）

該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備,、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的制備,。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域,。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

房間的面積宜控制在15㎡~20㎡,。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)正壓狀態(tài),，以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染,。

2.2標(biāo)本制備區(qū)（2區(qū)）

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存,、核酸(RNA、DNA)提取,、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成,。

標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25㎡~30㎡之間。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染,，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng),。

2.3 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)（3區(qū)）

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外,，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行,。

擴(kuò)增室主要配備PCR實(shí)驗(yàn)室的核心儀器PCR儀，在實(shí)驗(yàn)室建造過(guò)程中,，需要給PCR儀配備專門的UPS電源,，以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15㎡~20㎡,。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng),。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。建議采用≥10Pa壓差,，在控制上比較容易實(shí)現(xiàn),。

2.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)（4區(qū)）

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,，因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域,。

在室內(nèi)配備通風(fēng)櫥，保證房間內(nèi)的相對(duì)負(fù)壓,，空氣從室外流向室內(nèi),。該區(qū)面積控制在15m2~20m2。

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