詳細介紹
TOM-酰胺在RNA合成中的亮點:1,2
ChemGenes 根據(jù)GMP準則生產(chǎn)2' - O-三異丙基甲硅烷基-氧基甲基(TOM)酰胺,。ChemGenes擁有完善的技術(shù),可以以優(yōu)惠的價格生產(chǎn)大量(千克級批次)TOM酰胺,。
TOM酰胺非常適合大規(guī)模治療級RNA合成,,長RNA序列,適體,,siRNA和生物學(xué)上重要的RNA分子,。
以下品質(zhì)使TOM酰胺成為治療性寡核苷酸生產(chǎn)的理想選擇。
像DNA酰胺一樣,,TOM酰胺具有更高的偶聯(lián)效率,。觀察到的每步耦合效率始終> 98%。
較高的耦合效率歸因于TOM組的較低位阻,。
快速的偶聯(lián)時??間(對于不同規(guī)模的合成,,需要2-4分鐘),并且*沒有3'雜質(zhì),。
N保護基團的脫保護時間短,取決于鏈長和大量的水,,時間為4-6小時,。
使用的不穩(wěn)定的堿保護基是(N -Ac-A;N -Ac-C和N -Ac-G),。
在溫和條件下和大量過量的水中可輕松去除TOM保護基,,而*。
對使用TOM酰胺合成的寡核苷酸質(zhì)量的研究表明,,使用TOM酰胺合成的RNA寡核苷酸經(jīng)過單次離子交換純化并通過CE(圖1)和ESI / MS分析進行分析后,,其質(zhì)量遠遠優(yōu)于其他寡核苷酸。
使用TOM酰胺化學(xué)法可整體上減少時間。所有步驟,,即,。,堿基脫保護,,TOM脫保護和易于純化,。除了高產(chǎn)率之外,該方法還導(dǎo)致高純度,。
圖1:使用2'- O- TOM酰胺的HPLC純化的12-mer RNA(12μmol 規(guī)模)的毛細管凝膠電泳(CE),。
華新康信有TOM-酰胺 ChemGenes大量現(xiàn)貨,歡迎電聯(lián),。
確認沒有甲醛加合物形成的研究:
在甲硅烷基的損失和甲醛的產(chǎn)生期間,,不會導(dǎo)致核苷堿基的C-5甲酰化或N-甲?;?。這是由于存在aq。TRIS緩沖液(pH 7.4),,可捕獲所有產(chǎn)生的甲醛并防止任何堿修飾(方案1),。從ESI / MS分析光譜數(shù)據(jù)可以明顯看出這些結(jié)果。質(zhì)譜數(shù)據(jù)均未顯示對應(yīng)于羥甲基加合物(CH2-OH)的任何峰,,無論是單個單元(M + 30)還是多個M + 30單元(圖2a和圖2b),。這些結(jié)果說明了使用TOM酰胺的清潔RNA合成。
方案1: TOM脫保護和捕獲甲醛的示意圖,。
圖2: ESI MS分析確認沒有M + 30或M + 30加合物的倍數(shù),;目標MS為3715.3(實測值為3715.3)。
RNA合成:
RNA的重要性早已在細胞過程中得到認可,。關(guān)注的主要領(lǐng)域是反義RNA 1和催化RNA在剪接和連接中的作用,。2定義序列的化學(xué)合成RNA是開發(fā)和了解RNA的作用和應(yīng)用的基礎(chǔ)。使用RNA聚合酶的酶促方法是模板依賴性的,,因此不是受控序列合成,。3 RNA的化學(xué)合成已經(jīng)完善到一定程度,可以有效地產(chǎn)生長序列,,例如具有生物活性的76-mer tRNA和多毫克量,。4
小干擾RNA:
自線蟲秀麗隱桿線蟲5的描述以來RNAi已成為一種功能強大且廣泛使用的基因下調(diào)工具,Andrew Fire和Craig Mello榮獲2006年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎,,以表彰RNAi機制的發(fā)展,。RNAi途徑由稱為Dicer的內(nèi)源性核糖核酸酶啟動,該酶將長dsRNA分子加工成21-23個核苷酸的長siRNA分子的短片段,,兩個核苷酸3'突出端,。siRNA分子整合到RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)中,,兩條siRNA鏈之一解開。在RISC中關(guān)聯(lián)的單鏈反義分子序列選擇性結(jié)合特定的mRNA轉(zhuǎn)錄物,,并且來自該復(fù)合物的內(nèi)切核酸酶切割目標mRNA,。從近幾年開始6
RNAi提供了在細胞水平上了解和處理人類疾病的天文潛力。在廣闊且迅速發(fā)展的siRNA領(lǐng)域中,,該領(lǐng)域的一些重要進展是對細胞生物學(xué)和功能基因組學(xué)領(lǐng)域的自然調(diào)控機制的預(yù)測,。預(yù)期這將導(dǎo)致基于基因的藥物發(fā)現(xiàn)。目前,,*許多研究人員都極力主張進行基因控制,,基因敲除和靶標驗證。短dsRNA 通過化學(xué)合成獲得,。ChemGenes專業(yè)生產(chǎn)高純度的RNA單體,,用于該領(lǐng)域的研究和進一步開發(fā)。
乙硫基四唑(ETT)和苯硫基四唑(BMT)的用途:
已證明在合成中使用ETT或BTT作為激活劑可提高每個步驟的偶聯(lián)效率,。
華新康信有TOM-酰胺 ChemGenes大量現(xiàn)貨,,歡迎電聯(lián)。
產(chǎn)品貨號 產(chǎn)品名稱 品牌 規(guī)格
Macosko-2011-10(V+) Barcoded microparticles Chemgenes 10umol
DMT-1972 Extra large Drying Traps ChemGenes pack 10
DMT-1973 Large Drying Traps ChemGenes pack 10
"DMT-1975" Small Drying Traps ChemGenes pack 10
N-4000-03 "Universal UnyLinker Support ChemGenes
N-4000-05 Universal UnyLinker Support 500 ChemGenes 1g
N-4000-20 Universal UnyLinker Support 2000 ChemGenes 1g
N-4000-10 Universal UnyLinker Support 1000 ChemGenes 1g
DN-1597 chemgenes 100mg
DN-6493 chemgenes 100mg