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MARCKSL1抗體1出版物

兔多克隆| 貨號：11422-1-AP

物種特異性：人類,，老鼠

在以下位置檢測到正白平衡：人腦組織

在以下方面檢測到陽性IHC：人肺癌組織，人肝癌組織,，人胰腺癌組織

 

經過測試的應用

應用范圍：WB,，IHC，ELISA

應用程序未經測試,？請參閱我們的保證

注意：建議使用pH 9.0的TE緩沖液進行抗原回收,；（*）或者,，可以用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復

推薦稀釋度：

白平衡：1：500-1：1000

IHC：1：20-1：200

取決于樣品，在“驗證”選項卡中檢查數據

資源：兔子

純化方法：抗原親和純化

同型：IgG抗體

存儲：具有0.1％疊氮化NA和50％甘油pH 7.3的PBS,。儲存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下儲存,。

免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967

全名：類馬克1

計算分子量：195aa，20 kDa

觀察分子量：48 kDa的

GenBank登錄號：BC007904

基因編號（NCBI）：65108

基因符號MARCKSL1

同義字F52,，Mac MARCKS,，MACMARCKS，MARCKS like 1,，MARCKS like protein 1,，MARCKS related protein，MARCKSL1,，MLP,，MLP1，MRP

 

MARCKS樣蛋白1（MARCKSL1）在神經組織中廣泛表達,，也被稱為MARCKS樣蛋白（MLP）或MARCKS相關蛋白（MRP）,，屬于MARCKS家族，是高度酸性的肉豆蔻?；易宓孜飶V泛分布在包括巨噬細胞在內的各種細胞類型中,。由于SDS凝膠上的異常遷移或磷酸化，該蛋白質的計算分子量為20 kDa,，表觀分子量為42-48 kDa,。MARCKSL1的遺傳破壞導致神經管閉合缺陷，取決于肌動蛋白功能,，細胞形狀和細胞遷移的協(xié)調控制的事件,。人們認為MARCKSL1調節(jié)肌動蛋白的細胞骨架，從而參與主要的細胞反應,，如吞噬作用,，分泌，運動,，有絲分裂和膜運輸,。

 

免疫印跡和免疫沉淀法: 細胞裂解物的制備: 將 ripa 緩沖液加入細胞(35mm 的培養(yǎng)皿中加入100l，60mm 的培養(yǎng)皿中加入200l,，100mm 的培養(yǎng)皿中加入500l) ,，同時將培養(yǎng)皿置于冰上。 刮去電池,，輕輕地搖動懸掛,，或者在冰冷的房間里用搖桿或者軌道振動器搖動15分鐘來溶解電池。 在冰水中用浴用聲波儀進行聲波處理,，直到樣品不再粘稠,。 將細胞在12000克的溫度下4 °c 離心5分鐘,，取出顆粒。 把上清液移到新鮮的管子里,。 細胞裂解液的終濃度為2-3克 / 升,。 對 wb 來說，在裂解液中加入4個 sds 停止緩沖液,，終濃度為1個 sds。 免疫印跡法: 1,。 煮沸10分鐘后,，20-50升樣品將載入 sds 頁面。 對于大多數蛋白質來說,，建議以每道負荷量30-80克總溶解蛋白質,，因為細胞中80% 的蛋白質種類濃度非常低。 圖2,。 將凝膠浸泡在免疫印跡轉移緩沖液中,。 聚偏氟乙烯膜被推薦用于大多數蛋白質。 將薄膜浸入甲醇中1-2分鐘,，將薄膜在轉移緩沖液中浸泡10分鐘,，然后將其放置在一疊厚厚的浸過緩沖液的濾紙上。 然后用另一堆浸滿緩沖液的過濾紙蓋上,。 把轉移裝置蓋上,。 凝膠應該在膜的負面。 圖3,。 以每平方厘米1毫安的電流跑90分鐘,。 圖4。 在室溫下或在4 °c 的溫度下用緩沖液將細胞膜孵育1小時,。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘,。 5. 用阻斷緩沖液稀釋一級抗體。 在室溫下將細胞膜培養(yǎng)1.5小時,。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘,。 圖6。 用阻斷緩沖液稀釋二級抗體,。 在室溫下將細胞膜培養(yǎng)1小時,。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 圖7,。 用清洗緩沖液清洗隔膜310分鐘,。 圖8。 用 ecl 顯色,。

 

免疫沉淀法: 1,。 將200-350升的細胞裂解液(含有1-3毫克總蛋白質)轉移到微濾管中,。 加入150-300升培養(yǎng)液和1-4克一級抗體到細胞(或預先清除的)裂解液中。 JIA抗體濃度應通過滴定法確定,，用對照 igg (對應于一抗源)建立陰性對照實驗,。 在4 °c 的環(huán)境中輕輕搖晃孵化箱2-4小時或過夜。3,。 加入50升蛋白 a 或克瓊脂糖漿以獲得免疫復合物,。在4 °c 下輕輕搖動混合物1-4小時。 取下端蓋,，必要時將上清液從旋轉塔底部釋放出來,，再懸浮混合物以提高流速。 用1湯匙含1個蛋白酶抑制劑的量清洗珠子5次,。 后一次清洗后,，用500克離心機將旋轉塔在4c 下離心30秒，用收集管收集過濾液,，然后丟棄,。 將自旋柱置于新鮮的微濾管中，并將洗脫液集中起來,。 用40l 洗脫緩沖液洗脫,，離心8000ー10000g，在4c 條件下洗脫1min,，再用新的40l 洗脫緩沖液洗脫一次,。 在洗脫液中加入10l 堿中和緩沖液和30l4樣品緩沖液，95-100c 加熱5分鐘,。 存儲在零下20攝氏度或加載20-40升在 sds-頁面,，并檢測它由寬帶,。,、

 

組織培養(yǎng)細胞免疫熒光方案: 1,。 將細胞培養(yǎng)在小的圓形蓋玻璃上,。 4% pfa 或有機溶劑固定細胞20分鐘在4 c (如果你使用有機溶劑固定,，只需跳過步驟3,，直接進入步驟4),。 將玻璃倒入0.2% ttiton x-100-pbs 中5分鐘。4,。 用 bsa-pbs 在室溫下封閉細胞1h 或在4 °c 下封閉過夜,。 5. 在蓋玻片上加入50升特異性初級抗體，在室溫下的潮濕容器中培養(yǎng)1小時。 在每個蓋玻片上加入50升熒光標記的二級抗體,，室溫下在黑暗中的潮濕容器中孵育1小時。 用15% 的甘油或者小量的水溶液裝在載玻片上。8,。 在邊緣用指甲油封住YIN唇。石蠟包埋組織切片的免疫組織化學:。 二甲苯分別用兩種方法分離載玻片40分鐘和20分鐘。 轉移載玻片到100% 酒精,，95% 酒精,，80% 酒精,，60% 酒精和 ddh2o5分鐘,。 將載玻片放入裝有抗原恢復緩沖液的容器中，中間放置微波幾分鐘(700瓦烤箱) ,，讓恢復液在室溫下冷卻,。 用 tbs 清洗25分鐘。 在3% h2o2溶液中培養(yǎng)10分鐘,，阻斷內源性過氧化物酶活性,。 用 tbs 清洗25分鐘. 7。 將5-10% 的山羊血清置于 tbs 液中室溫封閉30分鐘。 排水滑梯幾秒鐘(不要沖洗) ,，擦拭圓形部分,。9。 應用 tbs 的一級抗體,。 在室溫下孵化1小時或在4 °c 下孵化一夜,。10。 用湯匙沖洗25分鐘,。 在室溫下應用預想的二級抗體30分鐘,。 用 tbs 沖洗25分鐘13。 在室溫下用色原顯影,，在顯微鏡下觀察,。14。 用流動的自來水沖洗5分鐘,。 在市長的蘇木精浴中反染30-60秒,。 在水中洗7-8次，然后自來水3分鐘,。17。 分別用60% 、80% 、95% 和100% 的酒精脫水5分鐘。 轉移到二甲苯5分鐘,。 空氣30分鐘,。19。安裝

 

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