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產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	品牌
11422-1-AP	Marcksl Antibody	Proteintech
10934-1-ap	Cyclin D2 Antibody	proteintech
10586-1-AP	STMN2 Antibody	proteintech

MARCKSL1抗體1出版物

兔多克隆| 貨號(hào)：11422-1-AP

物種特異性：人類(lèi),，老鼠

在以下位置檢測(cè)到正白平衡：人腦組織

在以下方面檢測(cè)到陽(yáng)性IHC：人肺癌組織,，人肝癌組織，人胰腺癌組織

 

注意：建議使用pH 9.0的TE緩沖液進(jìn)行抗原回收,；（*）或者,，可以用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)

推薦稀釋度：

白平衡：1：500-1：1000

IHC：1：20-1：200

取決于樣品，在“驗(yàn)證”選項(xiàng)卡中檢查數(shù)據(jù)

產(chǎn)品信息：

資源：兔子

純化方法：抗原親和純化

同型：IgG抗體

存儲(chǔ)：具有0.1％疊氮化na和50％甘油pH 7.3的PBS,。儲(chǔ)存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下儲(chǔ)存,。

免疫原信息：

免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967

全名：類(lèi)馬克1

計(jì)算分子量：195aa，20 kDa

觀察分子量：48 kDa的

GenBank登錄號(hào)：BC007904

基因編號(hào)（NCBI）：65108

基因符號(hào)MARCKSL1

同義字F52,，Mac MARCKS,，MACMARCKS，MARCKS like 1,，MARCKS like protein 1,，MARCKS related protein，MARCKSL1,，MLP,，MLP1，MRP

背景 ：

MARCKS樣蛋白1（MARCKSL1）在神經(jīng)組織中廣泛表達(dá),，也稱(chēng)為MARCKS樣蛋白（MLP）或MARCKS相關(guān)蛋白（MRP）,，屬于MARCKS家族，它是PKC的高酸性豆蔻?；易宓孜飶V泛分布在包括巨噬細(xì)胞在內(nèi)的各種細(xì)胞類(lèi)型中,。由于SDS凝膠上的異常遷移或磷酸化，該蛋白質(zhì)的計(jì)算分子量為20 kDa,，表觀分子量為42-48 kDa,。MARCKSL1的遺傳破壞導(dǎo)致神經(jīng)管閉合缺陷,，依賴(lài)于肌動(dòng)蛋白功能，細(xì)胞形狀和細(xì)胞遷移的協(xié)調(diào)控制的事件,。人們認(rèn)為MARCKSL1調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白的細(xì)胞骨架,，從而參與主要的細(xì)胞反應(yīng)，例如吞噬作用,，分泌,，運(yùn)動(dòng)，有絲分裂和膜運(yùn)輸,。

 

免疫印跡和免疫沉淀方案：

細(xì)胞裂解液的制備：

將RIPA緩沖液添加到細(xì)胞中（100μL放入35 mm皿中,，200μL放入60 mm皿中，500μL加入100毫米培養(yǎng)皿）,，同時(shí)將培養(yǎng)皿置于冰上,。刮擦細(xì)胞并輕輕搖動(dòng)懸吊在冷藏室中的搖桿或定軌振動(dòng)器上15分鐘裂解細(xì)胞。用浴超聲儀在冰水中超聲處理,，直樣品不再粘稠,。在4℃下以12000 g的速度離心細(xì)胞5分鐘以去除沉淀。移動(dòng)上清液換一個(gè)新鮮的管,。細(xì)胞裂解物的終濃度將為2-3μg/μL,。對(duì)于白平衡，添加4×SDS檔緩沖裂解液1×SDS終濃度,。

免疫印跡：

1.煮沸10分鐘后,，將20-50μL樣品上樣SDS PAGE。對(duì)于大多數(shù)蛋白質(zhì),，建議每泳道上樣量使用30-80μg總裂解物蛋白質(zhì),，因?yàn)榧?xì)胞中80％的蛋白質(zhì)種類(lèi)的濃度非常低。

2.將凝膠浸入蛋白質(zhì)印跡轉(zhuǎn)移緩沖液中,。大多數(shù)情況下建議使用PVDF膜蛋白質(zhì),。將膜浸入甲醇中1-2分鐘，然后將膜浸入轉(zhuǎn)移緩沖液10分鐘,，然后將其放在厚厚的緩沖液濾紙疊上,。然后用另一疊浸有緩沖液的濾紙覆蓋它。掩蓋轉(zhuǎn)移儀器,。凝膠應(yīng)在膜的負(fù)極,。

3.以1 mA / cm2的電流運(yùn)行90分鐘。

4.將膜在封閉緩沖液中于室溫下孵育1小時(shí)或過(guò)夜在4℃,。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘,。

5.用封閉緩沖液稀釋一抗。在37℃下孵育膜1.5小時(shí)室內(nèi)溫度。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘,。

6.用封閉緩沖液稀釋二抗,。在37℃下孵育膜1小時(shí)室內(nèi)溫度。用洗滌緩沖液洗滌膜3×5分鐘,。

7.用洗滌緩沖液洗滌膜3×10分鐘,。

8.用ECL顯色。

免疫沉淀：

1.將200-350μL細(xì)胞裂解液（包含1-3 mg總蛋白）轉(zhuǎn)移到微量離心管中,。

2.向細(xì)胞（或預(yù)先清除的）裂解物中添加150-300μL孵育緩沖液和1-4μg一抗。jia抗體濃度應(yīng)通過(guò)滴定確定,。用對(duì)照IgG建立陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)（對(duì)應(yīng)于原發(fā)性抗體來(lái)源）,。輕輕搖動(dòng)在4℃下孵育2-4小時(shí)或過(guò)夜。

3.加入50μLProtein A或G Sepharose微珠漿液以捕獲免疫復(fù)合物,。將混合物在4℃輕輕搖動(dòng)1-4小時(shí),。

4.取下端蓋，從旋轉(zhuǎn)柱底部釋放上清液,。必要時(shí),，重懸磁珠混合物以提高流速。

5.用含1x蛋白酶抑制劑的1x TBST將珠子洗滌5次,。后之后洗滌,，將旋轉(zhuǎn)柱在4℃下于500 g離心30秒，然后收集上清液并丟棄,。

6.將離心柱放在新的微量離心管中,，合并洗脫液。洗脫沉淀用40μl洗脫緩沖液在4℃下于8000-10000g離心1分鐘,，重復(fù)一次用新的40μl洗脫緩沖液洗脫,。

7.在洗脫液中加入10μl堿中和緩沖液和30μl4×樣品緩沖液，在95-100℃5分鐘,。將其保存在-20℃或在SDS-PAGE上加載20-40μl,，并通過(guò)WB。

組織培養(yǎng)細(xì)胞免疫熒光的協(xié)議：

1.在小的圓形玻璃蓋上培養(yǎng)細(xì)胞,。

2.用4％PFA或有機(jī)溶劑在4℃固定細(xì)胞20分鐘（如果您使用固定的有機(jī)溶劑,，則只需跳過(guò)第3步，然后直接進(jìn)行第4步）,。

3.將玻璃杯準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移5分鐘0.2％Ttiton X-100-PBS中,。

4.在室溫下用BSA-PBS封閉細(xì)胞1h，或在4℃下過(guò)夜,。

5.在蓋玻片上加入50μL特異性一抗,，并在室溫下孵育1小時(shí)在潮濕的容器中加熱溫度。用PBS清洗蓋板三遍。

6.在每個(gè)蓋玻片上加入50μL熒光標(biāo)記的第二抗體,，并在黑暗中于潮濕的容器中于室溫下孵育1小時(shí),。

7.將蓋玻片安裝在15％的甘油中或少量載玻片上。

8.用指甲油在邊緣上密封蓋玻片,。

石蠟包埋的組織切片的免疫組織化學(xué)方案：

1.在2種二甲苯中對(duì)載玻片進(jìn)行脫蠟處理,，一次40分鐘，另一次20分鐘,。

2.將玻片轉(zhuǎn)移到100％酒精,，95％酒精，80％酒精,，60％酒精和ddH2O中每次5分鐘,。

3.將載玻片放在裝有抗原回收緩沖液的容器中，并在中間放置微波以進(jìn)行操作,。幾分鐘（700 W烤箱）,，讓回收溶液在室溫下冷卻。

4.用TBS沖洗2×5分鐘,。

5.通過(guò)在3％H2O2溶液中孵育切片來(lái)阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性ddH2O 10分鐘,。

6.用TBS沖洗2×5分鐘。

7.在室溫下在TBS中封閉5-10％的山羊血清30分鐘,。

8.排干幻燈片幾秒鐘（請(qǐng)勿沖洗）并擦拭圓形部分,。

9.應(yīng)用在TBS中組成的一抗。在室溫或4℃下孵育1小時(shí)過(guò)夜,。

10.用TBST沖洗2×5分鐘,。

11.在室溫下應(yīng)用Envision二抗30分鐘。

12.用TBS沖洗2×5分鐘,。

13.在室溫下用發(fā)色團(tuán)（DAB）顯影,，在顯微鏡下觀察。

14.用自來(lái)水沖洗5分鐘,。

15.在市長(zhǎng)的蘇木浴中復(fù)染30-60秒,。

16.在水浴中洗7-8次，然后自來(lái)水3分鐘,。

17.用60％,，80％，95％和100％的酒精分別脫水5分鐘,。

18.轉(zhuǎn)移到二甲苯中5分鐘,。通風(fēng)30分鐘。

19.安裝

 

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