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Favorgen下FavorPrep™ Tri-RNA 試劑的操作使用
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FavorPrep™ Tri-RNA 試劑
FavorPrep™ Tri-RNAReagent 是一種來(lái)自改進(jìn)的苯酚和異硫氰酸胍 (GSN) 方法的試劑，用于單步 RNA 分離,。在樣品勻漿或裂解過(guò)程中,，Tri-RNA 試劑保持 RNA 的完整性，同時(shí)破壞細(xì)胞和溶解細(xì)胞成分,。 Tri-RNA 試劑的組成包括苯酚和 GSN 的單相溶液,。生物樣品在 Tri-RNA 試劑中勻漿或裂解，勻漿通過(guò)添加氯仿,、渦旋和離心分離成水相和有機(jī)相,。 RNA 僅保留在水相中（透明的上相），DNA 保留在中間相中,，蛋白質(zhì)保留在有機(jī)相中（紅色）,。通過(guò)加入異丙醇從水相中沉淀 RNA 并溶解/濃縮。如果需要,，可以分別用乙醇和異丙醇從中間相和有機(jī)相中依次沉淀 DNA 和蛋白質(zhì),，然后溶解/濃縮。
特征
★ 一步法從組織,、細(xì)胞,、細(xì)菌、植物,、酵母和生物體液中分離總RNA
★ 整個(gè)RNA分離過(guò)程不到1小時(shí),。
★ 純化后的RNA可應(yīng)用于：RT-PCR、Northern雜交,、RNase保護(hù)、Poly-A+RNA篩選,、差異展示和微陣列分析,。應(yīng)用
★ 100 次使用 儲(chǔ)存： 4℃ 棕色玻璃瓶中，供日常使用
程序：
1. 將 1 ml Tri-RNA Reagent 加入 100 mg 組織（或從最多 10 ml 血液或 106 個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞中沉淀的血液 RNA 病毒,，或 10 cm2 培養(yǎng)板）
2. 在 Tri-RNA Reagent 中使用玻璃 Teflon 或 Polytron 勻漿器勻漿組織樣品（培養(yǎng)細(xì)胞可以通過(guò)重復(fù)移液裂解,；濃縮的血液 RNA 病毒可以通過(guò)劇烈渦旋裂解）,。
3. 將勻漿在室溫下放置 5 分鐘。
4. 加入 0.2 ml 氯仿（未提供）并劇烈混合,。
5. 以 12,000 rpm 離心 3 分鐘以分離各相,，RNA 在透明的上層水相中。
6. 將 RNA 相轉(zhuǎn)移到干凈的管中,。
7. 加入 1x 體積的異丙醇,，渦旋以沉淀 RNA，在室溫下放置 10 分鐘,，然后以 12,000 rpm 離心 15 分鐘,。
8. 去除上清液。
9. 用 0.5 ml 冰冷的 70% 乙醇清洗 RNA 沉淀,，12,000 rpm 離心 1 分鐘,，小心除去上清液。
10. 短暫旋轉(zhuǎn)以確保 RNA 沉淀沉淀到管的側(cè)壁,，然后小心地去除任何殘留的上清液,，不要接觸 RNA 沉淀。
11. 將 RNA 重懸在少量 TE,，pH8.0 中
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