儀器組成操作方法
分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器,。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量,。
儀器主要由光源,、單色器、樣品室,、檢測(cè)器,、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成,。
原理
分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,通過系列分光裝置,,從而產(chǎn)生特定波長的光源,,光線透過測(cè)試的樣品后,部分光線被吸收,,計(jì)算樣品的吸光值,,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比,。
單色光輻射穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),,被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關(guān)系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度,;
I0為入射的單色光強(qiáng)度,;
I 為透射的單色光強(qiáng)度;
T 為物質(zhì)的透射率,;
k 為摩爾吸收系數(shù),;
L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長,;
c 為物質(zhì)的濃度,;
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長,以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù),。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,,測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),,除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外,,很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,,且常使用單色光純度較差的儀器,,故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作
操作方法
1.接通電源,打開儀器開關(guān),,掀開樣品室暗箱蓋,,預(yù)熱10分鐘,。
2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1"檔(若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0"時(shí),,需選用較高檔。)
3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動(dòng)波長選擇鈕,。
4.將空白液及測(cè)定液分別倒入比色杯3/4處,,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內(nèi),,使空白管對(duì)準(zhǔn)光路,。
5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器,,使讀數(shù)盤指針指向t=0處。
6.蓋上暗箱蓋,,調(diào)節(jié)“100"調(diào)節(jié)器,,使空白管的t=100,指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿,,分別讀出測(cè)定管的光密度值,,并記錄。
7.比色完畢,,關(guān)上電源,,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈
注意事項(xiàng)
1.該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi),,使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上,,室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng),,防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定,。
2.使用本儀器前,使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,,以及各個(gè)操縱旋鈕之功能,。在未按通電源之前,應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查,,電源接線應(yīng)牢固,,通電也要良好,各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確,,然后再按通電源開關(guān),。
3.在儀器尚未接通電源時(shí),電表指針必須于“0"刻線上,,若不是這種情況,,則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。