中瑞祥器凱氏定氮儀原理缺陷使用步驟
將有機(jī)化合物與硫酸共熱使其中的氮轉(zhuǎn)化為硫酸銨。在這一步中,,經(jīng)常會(huì)向混合物中加入硫酸鉀來提高中間產(chǎn)物的沸點(diǎn),。樣本的分析過程的終點(diǎn)很好判斷,因?yàn)檫@時(shí)混合物會(huì)變得無色且透明(開始時(shí)很暗)
在得到的溶液中加入少量氫氧化鈉,,然后蒸餾,。這一步會(huì)將銨鹽轉(zhuǎn)化成氨。而總氨量(由樣本的含氮量直接決定)會(huì)由反滴定法確定:冷凝管的末端會(huì)浸在硼酸溶液中,。氨會(huì)和酸反應(yīng),,而過量的酸則會(huì)在甲基橙的指示下用碳酸鈉滴定。滴定所得的結(jié)果乘以特定的轉(zhuǎn)換因子就可以得到結(jié)果,。
使用步驟
消化
1,、準(zhǔn)備6個(gè)凱氏燒瓶,標(biāo)號(hào),。1,、2、3號(hào)燒瓶中分別加入適當(dāng)濃度的蛋白溶液1.0mL,,樣品要加到燒瓶底部,,切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g,,濃硫酸2.0mL,,30%過氧化氫1.0mL。4,、5,、6號(hào)燒瓶作為空白對(duì)照,用以測(cè)定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì),,對(duì)樣品測(cè)定進(jìn)行校正,。4,、5、6號(hào)燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液,,其余所加試劑與1,、2、3號(hào)燒瓶相同,。2,、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上,接好抽氣裝置,。先用微火加熱煮沸,,此時(shí)燒瓶內(nèi)物質(zhì)炭化變黑,并產(chǎn)生大量泡沫,,務(wù)必注意防止氣泡沖出管口,。待泡沫消失停止產(chǎn)生后,加大火力,,保持瓶內(nèi)液體微沸,,至溶液澄清后,再繼續(xù)加熱使消化液微沸15min,。在消化過程中要隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)燒瓶,,以使內(nèi)壁粘著物質(zhì)均能流入底部,以保證樣品消化,。消化時(shí)放出的氣體內(nèi)含SO2,具有強(qiáng)烈刺激性,,因此自始自終應(yīng)打開抽水泵將氣體抽入自來水排出,。整個(gè)消化過程均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。消化后,,關(guān)閉火焰,,使燒瓶冷卻至室溫。
蒸餾吸收
蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內(nèi)進(jìn)行的,。凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多,,大體上都由蒸氣發(fā)生、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成,。
1,、儀器的洗滌
儀器安裝前,各部件需經(jīng)一般方法洗滌干凈,,所用橡皮管,、塞須浸在10%NaOH溶液中,煮約10min,,水洗,、水煮10min,,再水洗數(shù)次,然后安裝并固定在一只鐵架臺(tái)上,。儀器使用前,,微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌,以除去管道內(nèi)可能殘留的氨,,正在使用的儀器,,每次測(cè)樣前,蒸氣洗滌5min即可,。較長時(shí)間未使用的儀器,,重復(fù)蒸氣洗滌,不得少于三次,,并檢查儀器是否正常,。仔細(xì)檢查各個(gè)連接處,保證不漏氣,。 首先在蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸餾水,,加入數(shù)滴硫酸使其保持酸性,以避免水中的氨被蒸出而影響結(jié)果,,并放入少許沸石(或毛細(xì)管等),,以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經(jīng)插管流入反應(yīng)室,,但玻杯內(nèi)的水不要放光,,塞上棒狀玻塞,保持水封,,防止漏氣,。蒸氣發(fā)生后,立即關(guān)閉廢液排放管上的開關(guān),,使蒸氣只能進(jìn)入反應(yīng)室,,導(dǎo)致反應(yīng)室內(nèi)的水迅速沸騰,蒸出蒸氣由反應(yīng)室上端口通過定氮球進(jìn)入冷凝管冷卻,,在冷凝管下端放置一個(gè)錐形瓶接收冷凝水,。從定氮球發(fā)燙開始計(jì)時(shí),連續(xù)蒸煮5min,,然后移開煤氣燈,。沖洗完畢,夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管,,由于氣體冷卻壓力降低,,反應(yīng)室內(nèi)廢液自動(dòng)抽到反應(yīng)室外殼中,,打開廢液排出口夾子放出廢液,。如此清洗2~3次,,再在冷凝管下?lián)Q放一個(gè)盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口浸沒在溶液中,蒸餾1~2min,,觀察錐形瓶內(nèi)的溶液是否變色,。如不變色,表示蒸餾裝置內(nèi)部已洗干凈,。移去錐形瓶,,再蒸餾1~2min,用蒸餾水沖洗冷凝器下口,,關(guān)閉煤氣燈,,儀器即可供測(cè)樣品使用
缺陷
從凱氏定氮原理可以知道:凱氏定氮法是將含氮有機(jī)物轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)氮硫酸銨來進(jìn)行檢測(cè),以得到含氮量的測(cè)定值乘以一定系數(shù)得出蛋白質(zhì)含量,。而含氮有機(jī)物不僅僅是蛋白質(zhì),,還有三聚氰胺等等。在加上食品中蛋白質(zhì)含量的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)和國際通行測(cè)定方法是經(jīng)典凱氏定氮法,,這就為造假者提供了可乘之機(jī)。蛋白質(zhì)中的含氮量不超過30%,,三聚氰胺的最大的特點(diǎn)是含氮量很高(66%),,溶于水后無色無味,,也就是說在一杯清水中加入三聚氰胺,,然后用凱氏定氮法檢測(cè),,結(jié)果顯示是含有蛋白質(zhì)的。由于“凱氏定氮法"只能測(cè)出含氮量,并不能鑒定飼料中有無違規(guī)化學(xué)物質(zhì),所以,添加三聚氰胺的奶粉理論上可以測(cè)出較高的蛋白質(zhì)含量,。