分光光度計，又稱光譜儀(spectrometer),，是將成分復(fù)雜的光,，分解為光譜線的科學儀器。測量范圍般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380 nm的紫外光區(qū),。不同的光源都有其有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源,。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后，可得到由紅,、橙,、黃、綠,、藍,、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源,。
光度定義
分光光度法是在定波長處或定波長范圍內(nèi)光的吸收度,，對該物質(zhì)行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū),，(2)380~780nm的可見光區(qū),，(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū),。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計),、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計,。
原理
分光光度計采用個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置,，從而產(chǎn)生定波長的光源,，光線透過測試的樣品后，分光線被吸收,，計算樣品的吸光值,，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比,。
單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時,，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關(guān)系如下式:
A=-lg(I/I,。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I,。為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質(zhì)的透射率;
k 為摩爾吸收系數(shù);
L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長;
c 為物質(zhì)的濃度;
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長,，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù),。當已知某純物質(zhì)在定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量,。在可見光區(qū),，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析,。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應(yīng)用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作,。
維護保養(yǎng)
分光光度計作為種 儀器,，在運行作過程中由于作環(huán)境，操作方法等種種原因,，其 狀況然會發(fā)生某些變化,，可能影響設(shè)備的性能，甚至誘發(fā)設(shè)備故障及事故,。因此,，分析作者了解分光光度計的基本原理和使用說明，并能及時發(fā)現(xiàn)和排除這些隱患,，對已產(chǎn)生的故障及時維修才能保證儀器設(shè)備的正常運行,。
1)若大幅度改變測試波長，需稍等片刻,，等燈熱平衡后,，重新校正"0"和""點,。然后再測量。
2)針式儀器在未接通電源時,，電表的針位于零刻度上,。若不是這種情況，需行機械調(diào)零,。
3)比色皿使用畢后,，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,，以防止表面光潔度被破壞,，影響比色皿的透光率。
4)操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈,，以免影響光效率。
5)1900型等分光光度計,，由于其光電接收裝置為光電倍增管,，它本身的點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號,，而不能用來檢測強光,。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降,。針對其上述點,，在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下,，因此在預(yù)熱時,，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致作不穩(wěn),。
6)放大器靈敏度換擋后,，重新調(diào)零。
7)比色杯的配套性問題,。比色杯配套使用,，否則將使測試結(jié)果失去意義。在行每次測試前均應(yīng)行,。具體方法如下;分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液,，把儀器置于某波長處，石英比色杯;220nm,、700nm裝蒸餾水,，玻璃比色杯:700nm處裝蒸餾水，將某個池的透射比值調(diào)至,，測量其他各池的透射比值,，記錄其示值之差及通光方向,，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響,。
分光光度計分操作中容易出現(xiàn)的幾個典型故障及其排除方法:
1)儀器不能調(diào)零,。可能原因:
a)光門不能關(guān)閉,。解決方法:修復(fù)光門件,，使其關(guān)閉。
b)透過率""旋到底了,。解決方法:重新調(diào)整""旋鈕,。
c)儀器嚴重受潮。解決方法:可打開光電管暗盒,，用電吹風吹上會兒使其干燥,，并更換干燥劑。
d)電路故障,。解決方法:送修理 ,，檢修電路。
2)儀器不能調(diào)"",?？赡茉?
a)光能量不夠。解決方法:增加靈敏度倍率檔位,，或更換光源燈(盡管燈還亮),。
b)比色皿架未落位。解決方法:調(diào)整比色皿架使其落位,。
c)光電轉(zhuǎn)換分老化,。解決方法:更換件。
d)電路故障,。解決方法:調(diào)修電路,。
3) 測量過程中,""點經(jīng)常變動?？赡茉?
a)比色皿在比色皿架中放置的位置不致,，或其表面有液滴。解決方法:用擦鏡紙擦干凈比色皿表面,，然后將其安放在比色槽的左邊,，上面用定位夾定位。
b)電路故障(電壓,、光電接收,、放大電路)。解決方法:送修,。
4)數(shù)顯不穩(wěn),?？赡茉?
a)預(yù)熱時間不夠。解決方法:延長預(yù)熱時間至30分鐘左右(分儀器由于老化等原因,，長時間處于作狀態(tài)時,，也會作不穩(wěn))。
b)光電管內(nèi)的干燥劑失效,，使微電流放大器受潮,。解決方法:烘烤電路，并更換或烘烤干燥劑,。
c)環(huán)境振動過大,、光源附近空氣流速大、外界強光照射等,。解決方法:改善作環(huán)境,。
d)光電管、電路等其它原因,。解決方法:送修,。
五、提分光光度計透射比檢定及使用度的幾種方法
在分光光度計的使用或檢定中,透射比(吸光度)的準確度是衡量儀器作性能的項重要標,它的準確程度直接關(guān)系到所測數(shù)據(jù)的可信性及科學性,。所以提此項標的使用及檢定準確度顯得尤為重要。
