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技術(shù)文章

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法

閱讀:81          發(fā)布時間:2025-4-10

1,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法

陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,,將DNA分子包裹入內(nèi),形成DNA脂復(fù)合物,,也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附,,再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中,,是目前實驗室轉(zhuǎn)染方法之一,其轉(zhuǎn)染率較高,,優(yōu)于磷酸鈣法,。

2、磷酸鈣共沉淀法

該方法可重復(fù)性差,,而且磷酸鈣溶液對溫度,、pH和緩沖鹽濃度的變化十分敏感,對細(xì)胞尤其是原代細(xì)胞毒性較大,,也不能采用RPMI培養(yǎng)基,,因為其含有高濃度的磷酸鹽。

3,、電穿孔轉(zhuǎn)染法

電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時的小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi),,這種方法就是電穿孔。

當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時可以用電穿孔法轉(zhuǎn)染,。

一般情況下,,高電場強度會殺死50%-70% 的細(xì)胞。現(xiàn)在針對細(xì)胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護(hù)劑,,可以大大的降低細(xì)胞的死亡率,,同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。

4,、病毒感染

對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系可以采用病毒感染,,腺病毒,腺相關(guān)病毒,,逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體已廣泛用于哺乳動物細(xì)胞體內(nèi)外的基因轉(zhuǎn)染,,轉(zhuǎn)染效率比較高,適用于較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,。

但是插入的片段長度有一定限制,,最重要的是技術(shù)難度比較高,在一般實驗室中很難普及,,而且某些病毒起效時間比較慢,,跟不上細(xì)胞這種快速繁殖的速度,如果只是做簡單細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染性價比不高,。

沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實驗,,理想的方法應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型和實驗需要進(jìn)行選擇,,如果只是在細(xì)胞水平做,而且用的是簡單細(xì)胞系,,那么脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是綜合比較起來不錯的一個方法,。

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