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ACK紅細胞裂解液的原理及使用
閱讀:474 發(fā)布時間:2024-5-14原理:氯化銨是紅細胞裂解液的主要效應物質(zhì),氨根離子不能通過細胞膜,,而其他離子可以通過,,造成細胞內(nèi)外的離子濃度差異,形成了滲透壓差,,外部的水分會擴散至細胞內(nèi),,使紅細胞膨脹,達到裂解的效果,。
使用說明:
組織細胞樣品:
1.新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液,,離心棄去上清液;
2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液,,按1:3-5的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液),,輕輕吹打混勻;
3.800-1000rpm離心5-8分鐘,,離心棄去上層紅色清液,;
4.收集沉淀部分,加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次,;
5.如裂解不好可重復步驟2和3,;
6.重懸細胞,用于后續(xù)實驗,;如提取RNA,,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液中進行。
血細胞:
1.新鮮抗凝血,,離心棄去上清液,;
2.取出4℃冰箱預冷的ELS裂解液,按1:6-10的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml細胞壓積加入6-10ml裂解液),,輕輕吹打混勻,;
3.800-1000rpm離心5-8分鐘,離心棄去上層紅色清液,;
4.收集沉淀部分,,加入Hank’s液或無血清培養(yǎng)液離心洗2-3次;
5.如裂解不好可重復步驟2和3,;
6.重懸細胞,,用于后續(xù)實驗;如提取RNA,,最好是于步驟4開始使用DEPC水配制的溶液進行,。