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影響ELISA試劑盒試驗成果的要素
閱讀:629 發(fā)布時間:2023-10-26ELISA試劑盒,,即酶聯(lián)免疫法,。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng),、重復(fù)性好的特點,,并具有操作簡潔、無放射性危害的優(yōu)點,,因此多年來廣泛應(yīng)用于各高校,、醫(yī)院、血站和科研機(jī)構(gòu)的試驗室中,。
影響ELISA試驗的要素有如下三方面:
一,、試劑盒
1、抗原,、抗體活性對效價的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價下降或失活,,成果不易判別。再有ELISA試劑盒靈敏度高,,對雜質(zhì)的反響靈敏度也高,,試驗中空白對照OD值偏高或假陽性;
2,、酶結(jié)合物濃度過高,,也會導(dǎo)致OD值假性增高。
二,、試驗儀器
1,、加樣器是否通過校正,酶免測定血清用血量很少,,如手工加樣器的功能不好,,吸取樣品不,會使成果忽高忽低,;
2,、每次洗板前,應(yīng)查看洗板機(jī)針孔有無阻塞,。
三,、ELISA試劑盒操作
1,、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后運(yùn)用,試劑用完及時放回冰箱冷藏,,避免形成試驗成果假性下降,;
2、加樣時留意勿觸及包被板底部,,避免擦傷包被物使抗體(抗原)掉落而影響試驗成果的精確性,;
3、洗刷不充分,,會使成果假性增高,,過分洗刷呈假陰性;
4,、比色時應(yīng)保持包被孔底部無異物,、無水汽,特別是冬天板從37℃水浴箱取出時,,底部留有水汽,,應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色,水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高,;
5,、抗原與抗體反響達(dá)到平衡,依賴于溫度與時刻,。溫度高于45℃易引起失活及符號物掉落,,溫度低于4℃,影響反響速度,。
總歸,,由于ELISA試劑盒試驗的影響要素較多,在實踐工作中必須操作規(guī)范,、仔細(xì),,避免和排除各種要素的影響,使之得到精確可靠的查驗成果,。