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技術(shù)文章

超濾管的使用和注意事項(xiàng)

閱讀:3555          發(fā)布時(shí)間:2023-8-30

超濾是大分子脫鹽,、濃縮的方法,重復(fù)性好,,得率有保障,,已經(jīng)在蛋白、抗體,、病毒,、核酸、囊泡等樣品制備中建立標(biāo)準(zhǔn)操作,;在目前大熱的外泌體制備中也已經(jīng)成為主流方法,。
超濾管該如何使用?注意事項(xiàng)有哪些,?讓我們一起來看看吧!

使用方法
1,、預(yù)處理:
新超濾管:使用前用純水浸泡,,冰箱預(yù)冷10 min。然后將水倒出,,置于冰上預(yù)冷2-5 min,,加樣。
舊超濾管:倒出管內(nèi)的乙醇浸泡液,,用純水沖洗干凈10遍(注意水流速盡量平緩,,防止沖破濾膜),置于冰上預(yù)冷2-5 min,加樣,。
2,、加樣:
如超濾管中有少許殘留水可將超濾管內(nèi)管倒置1000×g離心1 min,移液槍移取適量樣本加入超濾管中,。
3,、離心:
配平,12000 ×g離心(15-30 min),,等達(dá)到目的轉(zhuǎn)速后方可離開,。
4、樣本收集 :
外管濾液為除去部分蛋白的樣本上清,,如需取濃縮后樣本用于其他實(shí)驗(yàn),,則另取外管,內(nèi)管倒置,,1000×g離心1-2 min,。
5、超濾管清洗
使用完的超濾管用純水反復(fù)清洗5次,,再用75%乙醇沖洗3次,。

注意事項(xiàng)
1、短時(shí)間存放與保存:0.1 M的NaOH浸泡1-2 h,,純水清洗,,然后用75%乙醇浸泡,務(wù)必使濾膜保持濕潤,,不能長菌,。
2,、長時(shí)間放置超濾管處理:0.1 M的NaOH浸泡1-2 h,,純水清洗,,然后用20%乙醇浸泡,,務(wù)必使濾膜保持濕潤,,不能長菌,。
3,、超濾管最大離心力不能超過12000g ,,否則會(huì)導(dǎo)致濾膜破損,。
4,、超濾樣本會(huì)損失五分之一至二分之一的樣本量,主要取決于樣本中蛋白含量,。
5,、若管底有可見的蛋白沉淀,可以先加入純水,,然后用槍頭吹打,,注意不要碰到膜,,吹打至沉淀懸起,然后倒掉,,不可用自來水猛沖,。
6、超濾管內(nèi)管不能用烘箱進(jìn)行烘干,。

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