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實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞增殖分析

1）制備細(xì)胞懸液,，計(jì)數(shù)。
2）在96孔板中接種細(xì)胞懸液,，每孔約100μl，同樣的樣本可做3個(gè)重復(fù),。
3）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間（37℃, 5%CO2）,，細(xì)胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細(xì)胞，該步驟可以省去,。
4）每孔各加入10μl CCK-8溶液,，由于加入的CCK-8量比較少，可能會(huì)因試劑沾在孔壁上而帶來(lái)誤差,，建議在加完試劑后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以幫助混勻,，或者直接配置含10%CCK-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入,。另外注意,，加樣的過(guò)程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。
5）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育1-4h,。因?yàn)榧?xì)胞種類不同,，形成的formazan的量也不一樣，所以如果顯色不夠的話,，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間,，特別是血液細(xì)胞形成的formazan很少，需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間（5-6h）,。
6）酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光值（OD）,。
7）若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,，室溫下避光保存,，這樣可以保證OD值在24h內(nèi)不發(fā)生變化。

實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞毒性分析

1）制備細(xì)胞懸液,，計(jì)數(shù),。
2）在96孔板中接種細(xì)胞懸液，每孔約100μl,，同樣的樣本可做3個(gè)重復(fù),。
3）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間（37℃, 5%CO2），細(xì)胞貼壁需要大約2-4h,，如果是懸浮細(xì)胞,，該步驟可以省去。
4）向培養(yǎng)板各孔中加入不同濃度的毒性物質(zhì)（藥物,、化學(xué)試劑等待檢測(cè)物質(zhì)）,。
5）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育一段時(shí)間，例如6,、12,、24、48h,，具體時(shí)間要看待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)和細(xì)胞的敏感性,。
如果待檢測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性,，可在加入CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，以去掉待測(cè)物質(zhì)的影響,。如果影響比較小或者沒有影響,，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可,。
6）向每孔中加入10μl CCK-8溶液,，由于加入的CCK-8量比較少，可能會(huì)因試劑沾在孔壁上而帶來(lái)誤差,，建議在加完試劑后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以幫助混勻,，或者直接配置含10%CCK-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入,。另外注意,，加樣的過(guò)程中盡量不要產(chǎn)生氣泡，以免影響OD值讀數(shù),。
7）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中孵育1-4h,。因?yàn)榧?xì)胞種類不同，形成的formazan的量也不一樣,，所以如果顯色不夠的話,，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，特別是血液細(xì)胞形成的formazan很少,，需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間（5-6h）,。
8）用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的吸光度（OD）。
9）若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,，室溫避光保存，這樣可以保證OD值24h內(nèi)不發(fā)生變化,。