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一,、原理： CCK-8試劑盒用于快速靈敏地檢測細胞增殖和細胞毒性。工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan），其顏色的深淺與細胞增殖成正比,，與細胞毒性成反比,，對同樣的細胞,，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關系。使用酶標儀在450nm波長處測定OD值,，可以間接反映活細胞的數(shù)量,。

二、用途：可用于細胞增殖測定,、細胞毒性測定,、腫瘤藥敏試驗等。

三,、實驗步驟：

1.種板數(shù)：根據(jù)你摸索的,，或者查閱文獻確定你需要的種板濃度，根據(jù)種板濃度對細胞懸液進行稀釋,，通常細胞增殖實驗每孔加入約1000-2000個細胞100ul,，細胞毒性實驗每孔加入約5000～10000個細胞100ul（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小,，細胞增殖速度的快慢等決定）,。

2.種板：以96孔板為例，96孔板橫向是1-12的數(shù)字,，縱向是A-H,，可做多個實驗組，每組設置4-6個復孔,，同時設置空白組,，最邊緣孔加入PBS緩沖液減少蒸發(fā)帶來的影響，然后將細胞置于37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12-24 h,。

3.加藥及加藥后孵育時間：觀察細胞細胞貼壁良好,，吸出各孔培養(yǎng)基，實驗組加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基,，空白組加入不含藥物培養(yǎng)基,，然后將96孔板在37℃ 5% CO2空氣的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間，根據(jù)不同實驗細胞需求選擇適當?shù)姆跤龡l件和時間,。

4.加入CCK-8：兩種方法,，每孔直接加入10ul的CCK-8溶液,或者配置成含10%CCK-8溶液的培養(yǎng)基以換液的形式加入,注意加入過程中避免產生氣泡，可以將槍頭浸入培養(yǎng)液中緩慢加入,。

5.加入CCK-8后孵育時間：將加完CCK-8的培養(yǎng)板放入37°C 5%CO2 培養(yǎng)箱中孵育1-4h,，CCK-8試劑加入后孵育時間也需要自己摸索，隨著時間的增加,，OD值就會增大,。可以在0.5h,、1.0h,、2.0h分別測OD值,，把OD值控制在1.0左右。

6.測OD值：將96孔板取出,，酶標儀檢測各孔在450nm波長處的OD值,，分析處理數(shù)據(jù)，繪制增殖曲線,。