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免疫熒光技術的特點及原理
閱讀:764 發(fā)布時間:2023-5-9免疫熒光技術(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術,,是標記免疫技術中發(fā)展最早的一種,。它是在免疫學,、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術,。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位,。
一、特點:
該技術的主要特點是:特異性強,、敏感性高,、速度快。主要缺點是:非特異性染色問題尚未解決,,結果判定的客觀性不足,,技術程序也還比較復雜。
熒光免疫法按反應體系及定量方法不同,,還可進一步分做若干種,。與放射免疫法相比,熒光免疫法無放射性污染,,并且大多操作簡便,,便于推廣。國外生產的TDM用試劑盒,,有相當一部分即屬于此類,,并且還有TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產,。
由于一般熒光測定中的本底較高等問題,熒光免疫技術用于定量測定有一定困難,。新發(fā)展了幾種特殊的熒光免疫測定,,與酶免疫測定和放射免疫分析一樣,在臨床檢驗中應用,。
二,、原理:
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,,所以當抗原抗體發(fā)生反應時,,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素,。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,,與其相應的抗原(或抗體)結合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應,。
直接法
將標記的特異性熒光抗體,,直接加在抗原標本上,經(jīng)一定的溫度和時間的染色,,用水洗去未參加反應的多余熒光抗體,,室溫下干燥后封片、鏡檢,。
間接法
如檢查未知抗原,,先用已知未標記的特異抗體(第一抗體)與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的抗體,,再用標記的抗抗體(第二抗體)與抗原標本反應,,使之形成抗體—抗原—抗體復合物,再用水洗去未反應的標記抗體,,干燥、封片后鏡檢,。如果檢查未知抗體,,則表明抗原標本是已知的,待檢血清為第一抗體,,其它步驟的抗原檢查相同,。
標記的抗抗體是抗球蛋白抗體,同于血清球蛋白有種的特異性,,如免疫抗雞血清球蛋白只對雞的球蛋白發(fā)生反應,,因此,制備標記抗體適用于任何抗原的診斷,。