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RIPA主要是從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白,。
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液,。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等,。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay,。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng),、中,、弱三類(lèi),。

使用方法：
對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻,。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM,。
2.對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液,，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾,，可以不洗),。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解,。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞,，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多,，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解,。

裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對(duì)于組織樣品：
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片,。
2. 融解RIPA裂解液,，混勻。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的最終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量,。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。
5. 充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清,，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作,。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,，不必使用勻漿器,，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組

注意事項(xiàng) ：
本試劑為強(qiáng)烈型裂解液,，可以提取核蛋白,，但在提取核蛋白的同時(shí)，也會(huì)將基因組一并釋放出來(lái),，造成細(xì)胞裂解液粘稠,，此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心,，離心后直接上樣電泳,；若想測(cè)定濃度，可入加少量 SDS（1%）,，煮沸后離心測(cè)濃度,。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒,，請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法檢測(cè)蛋白濃度,。

如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散粘稠狀物,，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。