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使用方法

一、儲存液和工作液制備

1）儲存液制備：用Hepe緩沖鹽溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II凍干粉，配制成10mg/ml的儲存液,，用0.22µM濾膜過濾除菌,。本儲存液置于2-8℃，2周穩(wěn)定,；根據(jù)單次用量分裝凍存,，高達2個月穩(wěn)定，避免反復(fù)凍融,。

2）工作液制備：使用時用合適的細胞培養(yǎng)液將儲存液稀釋到工作液濃度即可,，常用工作濃度為0.6-2.4 U/ml。不推薦使用>2.4 U/ml的工作濃度,。具體使用濃度請根據(jù)自身實驗體系或參考文獻來調(diào)整,。

二、組織分離

1）用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4mm小片,，之后用無菌PBS緩沖液清洗組織片幾次,；

2）用Dispase II工作液（0.6-2.4 U/ml）浸沒并37℃孵育進行組織解離；

3）置于水平搖床上,，低速轉(zhuǎn)動，37℃孵育直至組織 完/全 解離,；【注意】：第一次使用Dispase II,，通過細胞計數(shù)來確定總反應(yīng)時間。對于堅硬致密組織需要1h的孵育時間,，不過孵育時間幾小時也不會有副作用,。

4）若有需要，將消化產(chǎn)物用無菌不銹鋼網(wǎng)過篩,，從而分離解散細胞和殘留組織,，或當更大片段組織靜置到管底，輕輕倒出上層細胞,。若需要進一步解離,，則加入新鮮的Dispase II工作液到殘留組織。

5）低速離心收集細胞,，吸掉酶工作液,；

6）用適當?shù)募毎囵B(yǎng)液重懸細胞，置于正常預(yù)優(yōu)化條件下培養(yǎng),。

三,、細胞亞培養(yǎng)

1）用37℃預(yù)熱的Dispase II工作液完/全覆蓋細胞，置于37℃孵育5min,；

2）吸掉溶液,，于37℃再孵育10min；

3）顯微鏡觀察以確定消化情況，若有需要,，可再孵育15min,；

4）用細胞培養(yǎng)液重懸細胞，低速離心并用培養(yǎng)基清洗細胞幾次,；

5）用新鮮細胞培養(yǎng)液重懸細胞,；

6）按照常規(guī)方法進行分盤傳代。

注意事項

1）Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注冊商標,。

2）為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。