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細胞培養(yǎng)基常見成分及作用功能介紹
閱讀:1062 發(fā)布時間:2022-9-27能量來源
每一個生長培養(yǎng)基都需要碳源,以供細胞新陳代謝,。碳源通常是葡萄糖,,但也可以是其他糖類,如半乳糖,、己糖,、果糖或其他碳源(如丙酮酸,谷氨/酰胺),。葡萄糖通常以終濃度為5.5 mm的含量添加,,大約等于人體血液中的葡萄糖水平。然而,,你可以購買葡萄糖濃度變化范圍很廣的培養(yǎng)基來滿足你的具體需求,。你甚至可以購買不含葡萄糖的培養(yǎng)基,然后自己定制濃度,,模擬高糖的糖尿病狀況,,或者研究低糖應(yīng)激反應(yīng)。
緩沖液
細胞需要一種特殊的pH值從7.2到7.4,,否則它們無法最好地發(fā)揮細胞功能,,以供生長和存活。在二氧化碳含量較高的培養(yǎng)器中,二氧化碳與水發(fā)生反應(yīng),,產(chǎn)生氫離子,,使培養(yǎng)基酸化。為了中和二氧化碳產(chǎn)生的酸度,,并在培養(yǎng)基中保持最佳pH值,,大多數(shù)培養(yǎng)基都使用化學緩沖系統(tǒng)。然而,,一些緩沖方法會干擾細胞生長,。
哺乳動物細胞常見的緩沖系統(tǒng)是碳酸/氫鈉,生物影響最小,。碳酸/氫鈉與氫離子反應(yīng)生成二氧化碳,,隔離它們以保持pH值。然而,,碳酸/氫鈉的一個缺點是,,它在生理pH值上不是最佳的緩沖效果。為了避免這個問題,研究人員經(jīng)常使用替代品,,如HEPES,,增加某些培養(yǎng)基類型的緩沖能力。
酚紅
由于維持pH值對細胞培養(yǎng)至關(guān)重要,,許多培養(yǎng)基配方包括一種名為酚紅的pH指示劑,,其在酸性條件下變黃(< 6.8),在基本條件下呈粉紅色(> 8.2),。雖然通常不是問題,,但酚紅可以模擬雌激素,因此,,當培養(yǎng)表達雌激素受體的細胞類型時,,通常被排除在外。沒有酚紅的培養(yǎng)基可以用于比色測定,,如MTT細胞增殖實驗,,苯/酚的色譜可能會干擾光譜光度測量的讀數(shù),從而使結(jié)果混淆,。
血清
對許多培養(yǎng)體系來說,,一個重要組成部分是血清,通常是胎牛血清,,稱為FBS,。血清來自于血液,是糖,、鹽,、脂類,、生長因子等許多成分的混合物。由于它的生物來源,,很難維持再生性,,因為每一批血清都是獨1無2的。為了規(guī)避這一問題,,一些實驗室使用化學定義的血清替換物,一些實驗室則購買一整批次的特定的血清,,以確保一致的結(jié)果,。
代謝物,維生素和礦物質(zhì)
DMEM的成分列表主要分為三大類:氨基酸,、維生素/輔因子和無機鹽(包括鈣和鎂),。許多這些成分在所有細胞培養(yǎng)基中都是常見的,而精確的組合和濃度已經(jīng)對細胞生長進行了優(yōu)化,。盡管如此,,許多實驗室還是選擇用額外的非必需氨基酸補充他們的培養(yǎng)基,以防止細胞使用葡萄糖或谷氨/酰胺來合成,。此外,,一些公司生產(chǎn)無鎂和鈣的培養(yǎng)基用于特定的研究,選擇時請仔細查看,。
抗生素
很多實驗室都在他們的細胞培養(yǎng)中加入抗生素,,以防止不需要的細菌或真菌的生長,即使是無菌工作,。常用的抗菌補充劑是青/霉素和鏈/霉素(pen/strep)的組合,,在完整細胞培養(yǎng)基中,終濃度為青/霉素50-100 IU/mL和鏈/霉素50 -100 g/mL,。然而,,一些實驗室選擇不使用抗生素,因為抗生素會對細胞產(chǎn)生不必要的影響,,或者可以掩蓋低水平的細菌污染,。根據(jù)需要,你可以決定是否在培養(yǎng)基中使用抗生素,。