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細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液出現(xiàn)渾濁的原因
閱讀:2466 發(fā)布時(shí)間:2022-5-31可能原因:1 細(xì)胞崩解了;2 培養(yǎng)基可能污染了,取部分培養(yǎng)基進(jìn)行檢菌試驗(yàn),。
細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,、支原體污染,、原蟲污染、黑膠蟲污染,、真菌污染,、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下:
1、細(xì)菌:細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯,。
2、支原體:黑色的,好象多為多形,,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁,原體感染,,國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測(cè),而支原體是牛血清中最常見的微生物之一,。而且它不能用過濾的辦法除去,,支原體感染細(xì)胞以后,細(xì)胞病變不很明顯,,只是慢慢死/去,。
3,、黑膠蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,,低倍下為黑色點(diǎn)狀,,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養(yǎng)液也是不渾的,,一般不會(huì)太影響,,細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,,且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無明顯增多,,且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化,,可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,。對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響,在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失,,除更換血清外無須特殊處理,。
4、真菌:一般培養(yǎng)液清亮,,不變色,,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片,,只是它很多很多的小塊很清楚,,象珊瑚狀,不象細(xì)胞碎片分不清,慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物,。真菌生長(zhǎng)的比較慢,,不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,,也很難救活了,。
5、原蟲:培養(yǎng)液可輕微渾濁,,顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多,輕微活動(dòng),,細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢,,而且細(xì)胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,,細(xì)胞不透亮,。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營養(yǎng),這種共生是非常普遍的,,但他們的數(shù)量小,,細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng),,只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng),最終形成惡性循環(huán),。
6.病毒:組織細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,如果沒有除去潛在的病毒,就會(huì)產(chǎn)生病毒污染,。目前,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒,,盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的,。因此,,潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題 ,。
7,、非同種細(xì)胞污染 :即是細(xì)胞交叉污染,由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開,,往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染,。目前,世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染,,致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無效,。非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生,大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致,。