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技術(shù)文章

葡聚糖凝膠的性質(zhì)和作用

閱讀:1202          發(fā)布時(shí)間:2021-11-18

葡聚糖凝膠指的是由一定平均相對(duì)分子質(zhì)量的葡聚糖(dextran) 和甘油基以醚橋形式相互交聯(lián)而成,,具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),應(yīng)用面廣的一類(lèi)凝膠,,國(guó)外商品名為Sephadex。交聯(lián)度的大小,可通過(guò)控制交聯(lián)劑(一般為環(huán)氧氯b烷) 和葡聚糖的配比以及反應(yīng)條件來(lái)控制,。

性質(zhì):
1、化學(xué)穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學(xué)降解),。它在水,、鹽溶液、有機(jī)溶劑,、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,,在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長(zhǎng)期接觸氧化劑將破壞凝膠,,因而應(yīng)避免使用,。
2、物理穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠并不熔融,,可以在濕態(tài),、中性PH進(jìn)行滅菌或在高壓滅菌器120℃,、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開(kāi)始焦糖化,。葡聚糖凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于交聯(lián)度,。

產(chǎn)品用途
利用分子篩作用,進(jìn)行多肽分離,、脫鹽,、清洗生物提取液、分子量測(cè)定,。
交聯(lián)葡聚糖的商品名為Sephndex,,不同規(guī)格型號(hào)的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍,。

方法分類(lèi)
1.乙醇浸泡:在室溫下,,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí),并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,,用無(wú)鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2.無(wú)鹽水浸泡:室溫下,,在無(wú)鹽水中充分溶脹24小時(shí),間隙攪拌,,以保證凝膠的*溶脹,,然后;
3.鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時(shí),,間隙攪拌,,濾干,水洗至中性,;
4.將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),,注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層,;
5.上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值),;
6.凝膠過(guò)濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,,視分離情況可以調(diào)整,;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),,柱高控制在40-50cm以下,,過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免,。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,,脫鹽時(shí)高徑比為5:1即可;
7.洗脫方法:可以用無(wú)鹽水,,也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫,;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化,;
8.在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白,。方法是以
40cm/h用1M氫氧化na反向洗四個(gè)柱體積,,再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

儲(chǔ)運(yùn)特性
1,、未使用,,室溫保存即可。
2,、使用后保存方法如下:凝膠層析的載體不會(huì)與被分離的物質(zhì)發(fā)生任何作用,,因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進(jìn)行下一次的分離操作。但使用多次后,,由于床體積變小,,流動(dòng)速率降低或雜質(zhì)污染等原因,使分離效果受到影響,。此時(shí)對(duì)凝膠柱需進(jìn)行再生處理,其方法是:先用水反復(fù)進(jìn)行逆向沖洗,,再用緩沖溶液平衡,,即可進(jìn)行下一次分離。對(duì)使用過(guò)的凝膠,,若短時(shí)間保存,,只要反復(fù)洗滌除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì),加入適量防腐劑即可,;
3,、若長(zhǎng)期保存,則需將凝膠從柱中取出,,進(jìn)行洗滌,、脫水和干燥等處理后,裝瓶保存,。


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