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制備及其進(jìn)展
方法：提取基因組DNA作為模板,，通過(guò)PCR擴(kuò)增得到酶基因,，經(jīng)DNA體外重組構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒。結(jié)果：實(shí)現(xiàn)在大腸桿菌中的表達(dá),，并成功轉(zhuǎn)化黃原膠菌株,。轉(zhuǎn)化過(guò)程提示黃原膠菌株可能具有某些特殊性。

建立了一種經(jīng)濟(jì),、簡(jiǎn)便的一步酶法,，大量合成尿苷二磷酸葡萄糖。在酶法合成中,，用UTP代替ATP,，并建立了UTP的再生系統(tǒng)；建立了反復(fù)補(bǔ)加法和酶回收法,，使酶的利用率達(dá)到最高,。
黃原膠是由野油菜黃單胞菌（Xanthomonascampestris）分泌的胞外雜多糖，是目前產(chǎn)量最高的微生物多糖之一,，具有假塑性,、溫度和pH穩(wěn)定性，以及與鹽類良好的相容性,，廣泛應(yīng)用于食品,、石油、化工,、醫(yī)藥等領(lǐng)域,。國(guó)外關(guān)于黃原膠的研究從20世紀(jì)60年代起步，國(guó)內(nèi)自70年代開始,，包括菌種選育,、發(fā)酵工藝研究、黃原膠理化性質(zhì)探討及其免疫學(xué)活性分析等,。經(jīng)查閱資料發(fā)現(xiàn),，在黃原膠的合成過(guò)程中，含糖的底物需要尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶（uridinediphosphateglucosedehydrogenase,，UDPGD）的催化才能生成葡萄糖醛酸,，而后者是黃原膠生物合成的前體之一。故此，我們?cè)O(shè)想以黃原膠菌株基因組DNA為模板,，通過(guò)合成引物,、擴(kuò)增、克隆得到UDPGD基因,，在實(shí)現(xiàn)大腸桿菌的表達(dá)后,，再轉(zhuǎn)入原黃原膠菌株，希望UDPGD酶量的增加能夠帶來(lái)黃原膠產(chǎn)量增加的正效應(yīng),。文獻(xiàn)報(bào)道UDPGD基因全長(zhǎng)1338bp,，285bp處含PstⅠ切點(diǎn)，740bp處含BamHⅠ切點(diǎn),，編碼445個(gè)氨基酸,，蛋白相對(duì)分子質(zhì)量48432。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn),，我們對(duì)UDPGD的研究工作取得了初步結(jié)果,。