日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

什么是細胞培養(yǎng)？

有哪三種細胞培養(yǎng),？

細胞培養(yǎng)的條件是什么,？

細胞培養(yǎng)的具體步驟是什么？

 

定義:細胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌,、適宜溫度,、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存,、生長,、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法,。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術,。不論對于整個生物工程技術,，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養(yǎng)都是一個*的過程,，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)?？寺　＜毎囵B(yǎng)技術可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,，這是克隆技術*的環(huán)節(jié),，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術,，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞,，又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝,、細胞的生長增殖等,。

 

細胞培養(yǎng)的分類：動物細胞培養(yǎng)、植物細胞培養(yǎng),、微生物細胞培養(yǎng)

 

細胞培養(yǎng)的條件：

1．培養(yǎng)基

細胞培養(yǎng)基包含細胞生長所需的各種營養(yǎng)物質(zhì),，包括碳水化合物、氨基酸,、無機鹽,、維生素等。針對不同細胞的營養(yǎng)需求,，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇,，如EBSS、Eagle,、MEM、RPMll640,、DMEM等,。

2．其他添加成分

在各種合成培養(yǎng)基提供基礎營養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分,，如血清,、因子等。

血清提供的是細胞外基質(zhì),、生長因子和轉鐵蛋白等重要物質(zhì),，常用的是胎牛血清。要根據(jù)不同的細胞和不同的研究目的決定添加血清的比例,。10%～20%的血清能維持細胞較快的生長增殖速度,，稱為生長培養(yǎng)液,；為維持細胞緩慢生長或不死，添加2%～5%的血清即可,，稱為維持培養(yǎng)液,。但血清中也存在有害于細胞生長和繁殖的物質(zhì)，如補體,、免疫球蛋白和一些生長抑制因子,；成分不明確，影響對結果的分析,；不同動物,、不同批次的血清活性差別較大，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性,。

谷氨酰胺是細胞生長重要的氮源,，在細胞生長代謝過程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解,，4℃下放置7天即可分解約50%,，故谷氨酰胺需在使用前添加。

 

細胞培養(yǎng)的具體步驟：

一,、細胞復蘇

將凍存細胞從液氮中取出后,，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中,，加入10ml預熱的DMEM*培養(yǎng)基,，輕輕吹勻，離心,，2000rpmX2min,，棄上清液。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗,，棄上清液,。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打,，接種于10cm盤中,，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

二,、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基,，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶,，放入細胞培養(yǎng)箱3min,。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤,，轉移至15ml離心管,，2000rpmX2min，棄上清液,。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌,，保存于40C），吹勻,，吸取10微升進行計數(shù),，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

三,、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養(yǎng)基,，10ml PBS清洗2次,。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養(yǎng)箱3min,。加入lmlDMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化,，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤,，轉移至15ml離心管,，2000rpmX2min，棄上清液,。加入1ml凍存液（90%血清,，10%DMSO），放入凍存盒內(nèi)（盒內(nèi)有異丙醇,，以保證溫度降低的速度）,，立即放入一80℃冰箱內(nèi)，過夜,，第二天放入液氮中,，可以保存至少兩年，如不放入液氮,，可以保存三個月,。

凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖,。