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介紹：

ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒,、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,，比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒,、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。

Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,，特異性強(qiáng),，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存,，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素,，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,。

 

特點(diǎn)：

1.高效、靈敏,、特異的抗體,。

2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性。

3.吸附性能好,，空白值低,，孔底透明度高的固相載體,。

4.適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種標(biāo)本類型,。

5.節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),。

 

操作方法

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋，請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,。

2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。

3. 加樣：不規(guī)范的移液操作可能帶來(lái)誤差。

1）空白孔,，空白對(duì)照孔不加樣品,，生物素標(biāo)記的抗NE抗體，鏈霉親和素-HRP,，只加顯色劑A&B和終止液,，其余各步操作相同；

2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,，鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,，故不加)；

3）待測(cè)樣品孔：加入樣本40ul,，然后各加入抗NE抗體10ul,、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜,，輕輕震蕩混勻,，37℃溫育60分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘。

7. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

8. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

9. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算,。

 

洗板方法

一、手工洗板方法：

甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次,。 

二,、自動(dòng)洗板：

如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,。

 

注意事項(xiàng)

1.從2-8℃取出的試劑盒,，在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。

3.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

4.為避免交叉污染,，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

5.不同批次試劑盒不能混用,，如遇試劑不夠,，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系客服解決

6.底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。

7.中,、英文說(shuō)明書(shū)或許會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。  

8.保存溫度：2-8℃,。

9.有效期：6個(gè)月(2-8℃),。