很多實(shí)驗(yàn)新手剛剛做酶聯(lián)免疫試驗(yàn),，都會(huì)有很多不了解的方面,，聯(lián)碩生物將是您身邊的實(shí)驗(yàn)好幫手,。今天,，小編在這里要和大家分享下如何運(yùn)用酶標(biāo)記抗體法染色,。

酶標(biāo)記抗體法的實(shí)驗(yàn)原理總體來說和熒光素標(biāo)記抗體法的原理類似，分為直接法和間接法,，其原理基本相同,，但敏感性不同。
一,、直接法
直接法是將酶（如HRP）標(biāo)記在特異性抗體（*抗體）上,，然后用酶標(biāo)記抗體直接與相應(yīng)原特異性結(jié)合，形成抗原—抗體—HRP復(fù)合物,，然后用酶底物DAB-H202顯色,。該法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、步驟少,，省時(shí),、特異性高、非特異性染色輕：缺點(diǎn)是敏感性差,，因?yàn)橐粋€(gè)抗原決定簇只結(jié)合一個(gè)HRP分子（假設(shè)一個(gè)抗體分子與一個(gè)HRP分子結(jié)合）,。另外，一種標(biāo)記抗體也只能檢測(cè)一種抗原,。若要檢測(cè)多種抗原,，就必須標(biāo)記每一種特異抗體，這樣既麻煩又不經(jīng)濟(jì),。目前此法很少應(yīng)用,，但在單克隆抗體制備過程中，為了更特異地篩選單抗,，仍常用此法,。
二、間接法
間接法也稱夾心法,，是直接法的簡(jiǎn)單改進(jìn),，將酶示蹤物標(biāo)記在二抗上，再與*抗體（已與相應(yīng)抗原反應(yīng)形成復(fù)合物的IgG）反應(yīng),，然后進(jìn)行顯色反應(yīng),。此法要求第二抗體與特異性抗體（一抗）應(yīng)是不同種屬的動(dòng)物產(chǎn)生,，如特異性抗體（一抗）是兔抗人IgG，酶標(biāo)記抗體（二抗）則可以是羊抗兔抗體,。
間接法與直接法比較有以下優(yōu)點(diǎn)：
1,、應(yīng)用面較寬，僅標(biāo)記一種二抗就可以檢測(cè)眾多相同的*抗體,，例如眾多一抗為兔來源,，只要標(biāo)記一種抗兔二抗就可用于所有抗兔一抗的檢測(cè)，不需要對(duì)每種特異性抗體進(jìn)行標(biāo)記,；
2,、敏感性增加，*抗體的工作濃度在直接法的基礎(chǔ)上進(jìn)一步稀釋,；
3、可以商品化購(gòu)置,；
4,、可以設(shè)計(jì)各種對(duì)照。