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關(guān)于細(xì)胞樣的保存
閱讀:1336 發(fā)布時(shí)間:2020-6-12一,、操作步驟:
1,、在37℃ 5% CO2條件下將細(xì)胞加在處理的載玻片上,用培育基培育,,時(shí)間通過預(yù)試驗(yàn)確定,;
2、細(xì)胞長好后,,用洗刷液洗2分鐘×3次,,室溫下將其放入細(xì)胞固定液中固定30-60min,,蒸餾水洗刷;
3,、室溫下用洗刷液充沛洗刷固定細(xì)胞,,(干燥后-20℃冰凍保存2周以上)
4、雜交前將固定的細(xì)胞進(jìn)行如下處理,;順次在70%,,90%,100%的乙醇中浸泡,,脫水每次
5min,,用二甲苯洗刷,除掉殘留脂質(zhì)順次在100%,,90%,,70%乙醇中浸泡,進(jìn)行再水化,,每次5min,,后浸泡于洗刷液中;
5,、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細(xì)胞,,以增加細(xì)胞對(duì)大分子試劑的通透性,再用洗刷液洗5min,;
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6,、用1%甲醛固定10min,用洗刷液洗凈,。
二,、留意:
1、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理,。
2,、操作中重要的是及時(shí)固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,,以抑制RNA酶對(duì)mRNA的分解作用,。此外,過度固定對(duì)原位雜交有明顯的不利影響,。