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無菌操作的技術(shù)和注意事項(xiàng)
閱讀:1304 發(fā)布時(shí)間:2020-5-19玻璃器皿的消毒和清潔
⑴新購玻璃器皿的處理新購玻璃器皿應(yīng)用熱肥皂水洗刷,,流水沖洗,,再用1%~2%鹽酸溶液浸泡,以除去游離堿,,再用水沖洗,。對(duì)容量較大的器皿如試劑瓶,、燒瓶或量具等,,經(jīng)清水洗凈后應(yīng)注入濃鹽酸少許,慢慢轉(zhuǎn)動(dòng),,使鹽酸布滿容器內(nèi)壁數(shù)分鐘后傾出鹽酸,,再用水沖洗。
⑵污染玻璃器皿的處理
①一般試管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%shi炭酸浸泡,,再煮沸30分鐘,,亦可用肥皂或合成洗滌劑洗刷使盡量產(chǎn)生泡沫,,然后用清水沖洗至無肥皂為止。然i后用少量蒸餾水沖洗,。
②細(xì)菌培養(yǎng)用的試管和培養(yǎng)皿可先行集中,,用1kg/cm2高壓滅菌15~30分鐘,再用熱水洗滌后,,用肥皂洗刷,,流水沖洗。
③吸管使用后應(yīng)集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小時(shí),,逐支用流水反復(fù)沖洗,,再用蒸餾水沖洗。
④油蠟沾污的器皿,,應(yīng)單獨(dú)滅菌洗滌,,先將沾有油污的物質(zhì)棄去,倒置于吸水紙上,,100℃烘干半小時(shí),,再用堿水煮沸,肥皂洗滌,,流水沖洗,。必要時(shí)可用二jia苯祛污。
⑤染料沾污的器皿,,可先用水沖洗,,后用清潔或稀鹽酸洗脫染料,再用清水沖洗,。一般染色劑呈堿性,,所以不宜用肥皂的堿水洗滌。
⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡,,取出后流水沖洗,,再用肥皂或弱堿性煮沸,自然冷卻后,,流水沖洗,。被結(jié)核桿菌污染或不易洗凈的玻片,可置于清潔液內(nèi)浸泡后再?zèng)_洗,。
2,、無菌器材和液體的準(zhǔn)備將玻璃器具中的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶,、試管,、吸管等按上述方法洗凈烘干后,用一潔凈紙包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花,,裝入干凈的鋁盒或鐵盒中,,于120℃的干燥箱中干燥滅菌2小時(shí),,取出備用。對(duì)于手術(shù)器械,、瓶塞,、工作服以及新配制的PBS洗液,則采用高壓蒸氣滅菌法,,即在15磅的條件下,,加熱20分鐘。而對(duì)于MEM培養(yǎng)液,、小牛血清和消化液等需用G5或G6濾器負(fù)壓抽濾后使用,。
3、在無菌操作過程中,,重要的是要保持工作區(qū)的無菌,、清潔。因此,,在操作前20~30分鐘要先啟動(dòng)超凈臺(tái)和紫外燈,,并認(rèn)真洗手和消毒。在操作時(shí),,嚴(yán)禁喧嘩,,嚴(yán)禁用手直接拿無菌物品,如瓶塞等,,而必須用消毒的止血鉗,、鑷子等。培養(yǎng)瓶應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)操作,,并且在開啟和加蓋瓶塞時(shí)需反復(fù)用酒精燈燒,。對(duì)于吸管應(yīng)先用手拿后1/3處,戴上膠皮乳頭,,并用酒精燈燒烤之后再吸液體,。
4、常用清潔液的配制法
⑴重鉻suan鉀清潔液:可根據(jù)不同需要,,選用下列的任何一種濃度,。先將重鉻suan鉀溶于水中,再慢慢加入濃硫酸,。注意,,此時(shí)可產(chǎn)生高熱,應(yīng)防止容器破裂,。重鉻suan鉀清潔液除污力強(qiáng),,腐蝕性大,應(yīng)避免接觸皮膚和衣服,。為防止吸收空氣的水分而變質(zhì),,此液應(yīng)貯存于帶蓋的 容器中。如清潔效力較差,,可再加入少量重鉻suan鉀及濃硫酸,,還可繼續(xù)使用。直到液體變藍(lán)綠色,,即不能再用,。配制重鉻suan鉀清潔液時(shí),宜用耐高溫的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器,。使用
玻璃器皿時(shí),,應(yīng)特別注意防止產(chǎn)生高熱而破裂,切忌用量筒來配制,。
⑵磷酸三鈉將其配成5%~10%水溶液,,可用于洗滌玻璃器皿上的油污,但經(jīng)常使用腐蝕玻璃,,使器皿表面模糊,、毛糙。