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細(xì)胞均勻鋪板技巧
閱讀：1782 發(fā)布時(shí)間：2019-7-261,、一般96孔板,每孔是加100微升細(xì)胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入,，加完半邊板后,，將未加的細(xì)胞懸液混一下再，繼續(xù)加剩余的半邊板子,，都加完后蓋上蓋子,，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣,，注意把握力度,，太強(qiáng)或次數(shù)太多會導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好）,，依次敲擊剩余三個(gè)邊,，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱,。
6孔板12孔板或24孔板,，均采用將個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底,，然后用移液槍吸至第二孔,，同樣方法浸潤孔底，其它孔一次類推,，這樣整個(gè)孔底都是濕潤的,，細(xì)胞懸液會平鋪在整個(gè)孔底，加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細(xì)胞多,，而加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,，細(xì)胞分散較均勻，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下,。
2,、細(xì)胞懸液加完后，將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,，對著燈光,，從底部往上看，看細(xì)胞有沒有抱團(tuán),。然后從底部敲擊,，使之分散。
3,、如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,，建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下，效果不錯(cuò),，就是振幅小,，頻率高的那種,。
4、細(xì)胞要盡量打散,，大部分呈單個(gè)狀態(tài),。離心后，要充分懸??！還有轉(zhuǎn)移到六孔板后，是要晃得,！晃的時(shí)候不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,，不然細(xì)胞就全被帶到中間去了，就會不均勻,！
5,、一瓶細(xì)胞長滿后，正常處理,，在培養(yǎng)瓶里吹勻,，然后鋪6孔板，每孔2毫升,，鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,，然后放到培養(yǎng)箱里，輕微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈,?；旧?4小時(shí)之后觀察 每孔的細(xì)胞都會很均勻。
6,、計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,，混勻后，加到六孔板里,，六孔板按橫8字型晃，顯微鏡下觀察,，如果不均勻,，按上述方法再晃。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,，在種六孔板的過程中,，隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子，瓶子我通常是順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)圈,。
7,、放在水平板面上先上下移動(dòng)，再左右移動(dòng),，每個(gè)方向５到６次,，但關(guān)鍵的是搖完后直接放入培養(yǎng)箱中,，不要再做過多的運(yùn)動(dòng)，例如放到鏡下去看,，否則很容易就又聚到中間去了,。