【原理概述】

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術：在常溫恒溫下,，特殊修飾的反轉錄酶利用特異性引物和模板RNA合成cDNA鏈,，反應體系中的重組酶,、單鏈 DNA 結合蛋白和 DNA 聚合酶以新合成的 cDNA 鏈為模板進行快速核酸擴增反應,。依賴nfo 酶的作用,，加入根據模板設計的特異的分子探針,，使用膠體金技術（三明治夾心法）可以對最終結果進行檢測,。

【產品特點】

本試劑盒具有靈敏度高,、特異性強,、反應時間短（僅需 12 min）等優(yōu)點,，反應組分為干粉狀態(tài),，操作簡便,，易于保存,。本試劑對設備要求低,，金屬浴、水浴鍋等即可進行反應操作,，無需購買 PCR 擴增儀等價格高昂的專屬設備,。

【引物設計】

建議使用長度在 30-35 bp 的引物,，引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度；下游引物的 5’端標記一個修飾基團（常用生物素）,。引物設計避免形成二級結構而影響擴增,；擴增

子長度建議在 150-500 bp。

【熒光探針設計】

在上下游引物中間,，設計一段長度為46-52nt與目的片段互補的序列；5’端修飾一個抗原標記（典型 FAM）;在 5’端和 3’末端的中部位置標記一個 dSpacer（四氫呋喃,，THF）,，作為 nfo 的識別位點；3’末端標記一個修飾基團,，例如胺基、磷酸基團或 C3-Spacer 等,。

【試劑盒組成】

注：考慮到核酸降解問題,，RNA 系列產品不提供正對照模板和引物探針,。

【試劑盒儲存】

1．運輸溫度：≤ 20 oC的恒溫環(huán)境；

2．儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 °C（± 5 °C）恒溫環(huán)境,，避光保存,，避免重壓、反復凍融,；

3．產品有效期：14個月,；

4．生產日期見外包裝。

【注意事項】

1. 由于試劑盒靈敏度非常高,，在進行反應時請注意避免核酸污染,，并設置空白對照,；

2. 使用時請取出實驗所需的 MIRA 反應單元的數(shù)量,，剩余部分請置于存儲條件下,。