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醛縮酶的特性及測定方法

時間:2023/2/15閱讀:463
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醛縮酶是裂解酶的一種,狹義的指催化裂解1.6-二磷酸-D-果糖生成3-磷酸-D-甘油醛與α-二羥丙酮磷酸反應的酶(同時在糖異生中也可催化這個反應的逆反應),,即指1.6-二磷酸-D-果糖醛縮酶(Ec 4.1.2.13),。(廣義的指催化同形式反應的酶,,例如亦有將鼠李糖磷酸醛縮酶等統(tǒng)稱為醛縮酶),。

一、概況
1,、反應式
測定溫度為30℃,,最適pH為7.0。
2.米氏常數(shù)
3.專一性
酵母醛縮酶對果糖-1,6-二磷酸具有高度的專一性,,但是,,此酶與L-山梨糖-1,6-二磷酸反應速度僅為果糖-1,6-二磷酸反應速度的30%。
4.抑制劑
醛縮酶的抑制劑有 Cu2+,,Zn2+,,Ag+和鄰-苯菲繞啉。
5.純度要求
所需純度最(空白)低限度為9單位/毫克,,所含的D-甘油醛-3-磷酸脫氫酶與L-甘油-3-磷酸脫氫酶應分別小于0.01%與0.05%,。
6.意義
醛縮酶可用來測定果糖-1,6-二磷酸。血清中醛縮酶對于肌病是一項關(guān)鍵性的診斷試驗,,并且對于心肌梗塞,、肝病和急性精神病等病也有用處。
7.穩(wěn)定性
此酶以3.2MpH7.6的硫酸銨懸浮液保存在4℃下,,其穩(wěn)定期可達6個月之久,。pH 值小于4.5,則使此酶發(fā)生不可逆變性,。
二,、測定方法
1.反應式
經(jīng)Jagannathan等改進的反應式:
可在240nm處跟蹤吸光率的增量。一個單位即定為在規(guī)定的條件下溫度為25℃,,每分鐘能使吸光率增量變化為1.00時所需的活性,。
2.偶聯(lián)法
按反應式(5)在340nm處測量吸光率的減量,并由此可計算出酶活性?;钚?以毫單位/毫升醛縮酶表示)即等于吸光率差值ΔA(10分鐘)x129(于37℃),。

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