Bradford法總蛋白含量測試試劑盒

（C003-100T 分光光度計法）

一,、測定原理

在酸性溶液中，考馬斯亮藍G250（Coomassie brilliant blue G250）染料主要與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別是精氨酸和賴氨酸）和芳香族氨基酸的殘基通過疏水力相結合,，從而使染料的大吸收峰由波長465nm變?yōu)椴ㄩL595nm,，溶液的顏色由棕紅色變?yōu)樗{色。在一定蛋白濃度范圍內(nèi),，溶液在波長595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)濃度呈線性關系,。根據(jù)標準蛋白溶液繪制標準曲線，就可通過測定樣品在波長595nm的吸光度計算樣品的蛋白質(zhì)濃度,；然后根據(jù)公式計算生物樣品的可溶性蛋白質(zhì)含量,。

二、試劑組成

試劑一：顯色液 200ml×2瓶

試劑二：2.5mg/ml結晶牛血清蛋白（BSA）標準品,，0.5ml×1瓶

三,、儲存條件及有效期

試劑一：4℃避光保存；試劑二-20℃保存,?？杀４?2個月。

四,、試劑的配制

標準品的配制：在試劑二瓶中加入4.5mL雙蒸水,，充分混勻，得到5ml濃度為250μg/ml的標準蛋白溶液,。分別移取0,，100,，200，300,，400,，600，800,，1000μL于空試管中,，加入1000，900,，800,，700，600,，400,，200，0μL雙蒸水,，得到0,，25，50,，75,，100，150,，200,，250μg/ml的BSA標準品應用液。

五,、操作步驟

六、計算方法

1. 繪制標準曲線

以標準蛋白溶液濃度0,，25,，50，75,，100,，150，200,，250μg/ml為橫坐標,，以酶標儀測得的吸光值為縱坐標，繪制標準曲線并得到方程,，一般認為相關系數(shù)（R²）大于0.99可用,。實測得標準曲線如下：

2. 計算樣品濃度

由計算得到的方程求樣品濃度。

七,、注意事項

1. 染色液接觸皮膚后較難清洗,，請務必戴手套操作,。本實驗用過的比色皿及試管請在實驗結束后盡快使用酒精清洗，避免比色皿被染色,。

2. 本方法靈敏度高,，可以測定低至25μg/mL的蛋白質(zhì)濃度，蛋白濃度過高會超出標準曲線線性范圍,，務必稀釋后測定,。推薦標曲范圍0-250μg/mL，但實測0-500μg/mL濃度范圍內(nèi)標曲相關系數(shù)通常能夠達到要求以上,。具體范圍請用戶根據(jù)標曲制作情況判斷,。

3. Bradford法測定蛋白濃度不受一般濃度還原型試劑如β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)影響,；但受去垢劑影響,。如樣品處理時加入過SDS、Triton X-100,、Tween 等試劑,，建議改用其它方法如BCA法測定。