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恒溫?fù)u床在蛋白質(zhì)免疫反應(yīng)中的應(yīng)用:
① 封閉:將轉(zhuǎn)膜后的PVDF膜浸沒在5%脫脂奶粉封閉液中封閉,,搖床 50~60轉(zhuǎn),, 2 小時(shí)(室溫),。
② 一抗孵育:根據(jù)抗體說明書選擇適當(dāng)濃度稀釋抗體,,將稀釋好的抗體加入抗體孵育盒,,并將PVDF膜放入其中,,搖床50~60轉(zhuǎn),4℃孵育過夜,。次日取出,,TBST洗膜(3次/15 min,60轉(zhuǎn)),。
③ 二抗孵育:將二抗稀釋為合適的濃度,,PVDF膜放入稀釋的二抗工作液中,室溫孵育1小時(shí),,搖床80轉(zhuǎn),。孵育結(jié)束后,取出PVDF膜,,TBST洗膜(3次/15 min,,80轉(zhuǎn))
④ 顯影:吸取適量的化學(xué)發(fā)光試劑A液和B液,等體積混合,,均勻加在PVDF膜上,,孵育數(shù)十秒,使用凝膠成像系統(tǒng)曝光并獲取圖像,。經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)測(cè)量條帶灰度值,,計(jì)算實(shí)驗(yàn)蛋白的相對(duì)表達(dá)量
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