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上海錦玟:二氧化碳培養(yǎng)箱在動物細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用

時間:2019/6/30閱讀:2383
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    二氧化碳培養(yǎng)箱

    動物細(xì)胞多數(shù)需要微堿性環(huán)境,,pH約為7.2~7.4,,以不超出6.8~7.6范圍為宜。緩沖系統(tǒng)對于維持培養(yǎng)基的pH是至關(guān)重要的,,動物培養(yǎng)基的pH是通過模擬血漿中天然存在的

    CO2/NaHCO3(實際是CO32-/HCO3-)系統(tǒng)來控制的,。配置動物培養(yǎng)基時,會將NaHCO3作為等滲溶液的一部分添加到培養(yǎng)基,。

     一方面,,由于NaHCO3不穩(wěn)定,易分解產(chǎn)CO2,,CO2從培養(yǎng)液中游離到空氣中,,會使培養(yǎng)液pH升高,;另一方面,,細(xì)胞呼吸產(chǎn)生的CO2以及代謝產(chǎn)生的酸性代謝產(chǎn)物,又使pH降低,。

       在培養(yǎng)開始的一段時間,,細(xì)胞較少,呼吸產(chǎn)生的CO2較少,,前者作用大于后者,,培養(yǎng)液中pH可能會明顯上升,這就需要培養(yǎng)箱中補充一定量的CO2來維持pH,;而后期隨著細(xì)胞數(shù)目增多,,細(xì)胞產(chǎn)生CO2增加,后者作用便大于前者,,此時,,培養(yǎng)基中pH可能會明顯降低,盡管大多動物細(xì)胞耐酸能力比耐堿能力略強一些,,但如果超過警戒值,,則需要更換培養(yǎng)基進行傳代。

     培養(yǎng)液中一般加入酚紅作為pH指示劑,,所以此培養(yǎng)基中顏色變化是:櫻桃紅色→粉紅色→黃色,。如果使用培養(yǎng)基之前,先通入CO2,或在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)進行開放式培養(yǎng),,則培養(yǎng)基顏色變化是:櫻桃紅色→黃色,。如果培養(yǎng)基變黃,則需要及時更換培養(yǎng)基,。

    培養(yǎng)箱中CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中NaHCO3濃度相平衡,,如果培養(yǎng)箱中CO2濃度設(shè)定在5%,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量應(yīng)為1.97 g/L,;如果CO2濃度維持在10%,,則NaHCO3的加入量應(yīng)為3.95 g/L。

     動物細(xì)胞對pH變化比較敏感,,但植物細(xì)胞就沒那么嬌弱了,,培養(yǎng)過程中pH的變化幅度只要別太大,對它并不會造成明顯損傷,。

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